[发明专利]一种酿酒酵母Rav1p基因的克隆与表达方法无效
| 申请号： | 201110422761.2 | 申请日： | 2011-12-16 |
| 公开（公告）号： | CN103160517A | 公开（公告）日： | 2013-06-19 |
| 发明（设计）人： | 张震宇;徐灿 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N15/31 | 分类号： | C12N15/31;C12N15/10;C12N15/70;C07K14/395;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/22;C12R1/865 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 214122 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 一种酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)中Rav1p基因的克隆与表达方法，本发明设计了一对特异性引物，引物1：5’-ACCGGAATTCATGTCATTGAACTTTCTTCCAGGACGCC-3’(EcoR I)引物2：5’-CTACGCGTCGACTACAAAGTCATCTAGTAAGTTCTTG-3’(Sal I)，构建了酿酒酵母Rav1p的克隆方法和高效表达方法。RAVE复合物是调节酿酒酵母V-ATP酶活性的蛋白复合体，而Rav1p是RAVE复合物中分子量最大的一个亚基，利用本发明人构建的重组质粒可以实现Rav1p在酿酒酵母细胞内的基因敲除，从而构建高压二氧化碳敏感型酿酒酵母菌株。在食品饮料发酵后，可用高压二氧化碳灭活此酵母菌，既达到了除菌的目的，又不会影响食品的风味。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 酿酒 酵母 rav1p 基因 克隆 表达 方法 | ||
【主权项】：
一种酿酒酵母中Rav1p的基因的克隆方法。其特征是：针对酿酒酵母中RAVE复合物中的Rav1p亚基的基因，设计了引物引物1：5’ACCGGAATTCATGTCATTGAACTTTCTTCCAGGACGCC‑3’(EcoR I)引物2：5’‑CTACGCGTCGACTACAAAGTCATCTAGTAAGTTCTTG‑3’(Sal I)，以提取的基因组DNA为模板，用引物1和引物2扩增出长4074bp的目的基因，然后连接到表达载体pET28a上，从而构建Rav1p基因的重组原核表达载体。具体操作方法见实例1。
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