[发明专利]一种棕色蘑菇三级菌种扩繁体系的建立方法

摘要

本发明公开了一种棕色蘑菇三级菌种扩繁体系的建立方法，包括母种、液体菌种、栽培种的三级菌种扩繁。其中的母种培养基配方(g/L)：草炭土600g，葡萄糖20g，麦粒100g，硫酸镁1.5g，磷酸二氢钾1g，蛋白胨2g，水1000mL；液体菌种配方（g/L）：马铃薯200，葡萄糖20，蛋白胨2，磷酸二氢钾2，硫酸镁1，VB10.01，pH自然；栽培种的制作：麦粒土培养基(%)：麦粒92，石膏5，草炭土3。采用本发明的扩繁体系较之传统的固态三级菌种，扩繁周期缩短了38天。本发明研究出的棕色蘑菇三级菌种的最佳扩繁方案，对棕色蘑菇的大规模工厂化生产具有一定的指导意义。

主权项

一种棕色蘑菇三级菌种扩繁体系的建立方法，其特征在于它包括母种、液体菌种、栽培种的三级菌种扩繁组合在一起，建立的一种扩繁体系，其方法如下：（1）母种的制备：1）母种培养基配方，即草炭土培养基(g/L)：草炭土600g，葡萄糖20g，麦粒100g，硫酸镁1.5g，磷酸二氢钾1g，蛋白胨2g，水1000mL；2）配制培养基：取适量草炭土、麦粒，加入1000ml的清水中煮沸20～30min，滤液；向滤液中加入硫酸镁、磷酸二氢钾、蛋白胨、葡萄糖、琼脂，待药品溶化后，补足水分，分装试管；3）灭菌：121℃，灭菌20min，灭菌结束后，取出摆斜面；4）接种、培养：严格按照无菌操作将棕色蘑菇菌丝接种于斜面中部；25℃恒温培养至满管；5）挑杂、保存：将染菌、生长状态不佳的斜面去除后，将剩余斜面置于4℃冰箱保存，备用；（2）液体菌种的制备：1）液体菌种配方，即种子培养基（g/L）：马铃薯200，葡萄糖 20，蛋白胨 2，磷酸二氢钾 2，硫酸镁 1，VB1 0.01，pH自然；麸皮发酵培养基为（g/L）：麸皮 120，葡萄糖 15，蛋白胨 2，pH自然；2）配制种子液培养基：称取马铃薯处理后，加水煮沸30分钟，过滤，再加入葡萄糖、蛋白胨、磷酸二氢钾、硫酸镁 1，VB1，充分溶解后趁热过滤，分装，50mL/250mL三角瓶；3）灭菌，121℃，灭菌20min；4）制备种子液：灭菌结束后，取出放凉，严格按照无菌操作接种，取5块0.5 cm2新鲜斜面菌种接种于种子培养基中，25℃，150rpm摇床培养7天；5）配制发酵培养基：取麸皮，加入清水煮沸20‑30min，滤液，向麸皮煮液中加入葡萄糖、蛋白胨、硫酸镁、磷酸二氢钾，待药品溶解后，加入清水补足水分，分装，100mL/250mL三角瓶；6）灭菌：121℃，灭菌20min；7）接种、培养：将制备好的种子液以接种量 8%移入装发酵培养基的250mL三角瓶中，25℃，150rpm培养7天，即得棕色蘑菇液体菌种；8）挑杂：每日通过外观观察发酵液是否浑浊，有酸味，则说明被细菌污染，除去；（3）栽培种的制作：1）麦粒土培养基(%)：麦粒92，石膏5，草炭土3；2）煮麦：选择无虫蛀的小麦，倒入沸水中煮20～25分钟，并不断搅拌，煮至麦粒无白心时，立即停火将麦粒捞出，晾至表面无水迹；　　3）配料：将石膏、草炭土按比例加入，并将其翻拌均匀，即可装瓶；　　　　4）装瓶灭菌：121℃，灭菌2～2.5小时；　　5）接种：将所制备的液体菌种，以15%的接种量均匀喷入栽培种中，严格按照无菌操作要求操作；6）培养：将接种后的栽培种置于25℃恒温培养室中遮光培养，至满瓶；7）挑杂：将染菌、生长状态不佳的栽培种去除后，将剩余菌种保存备用。