[发明专利]一种疫苗生产用甲肝病毒的生产方法

摘要

本发明涉及生物技术领域，尤其是一种疫苗生产用甲肝病毒的生产方法，依次包括以下步骤：细胞的复苏和传代扩增；接种甲肝病毒种子；维持培养感染甲肝病毒的细胞；检测病毒感染复制情况；终止培养，弃维持液，收获培养感染细胞；收集细胞悬液；将细胞悬液提取、纯化。本发明不仅操作简单，生产强度不大；而且实现了基质细胞的高密度大规模培养，提高了甲肝疫苗的产量和质量稳定性，避免了常规生产工艺中由于人工操作带来的污染。

主权项

一种疫苗生产用甲肝病毒的生产方法，其特征在于：依次包括以下步骤：步骤一：细胞的复苏和传代扩增：将细胞复苏，并采用微载体生物反应器培养细胞；步骤二：接种甲肝病毒种子：当细胞浓度为106个/ml以上时，弃培养液，按照0.001～0.01MOI的比例混合接种甲肝病毒种子；步骤三：维持培养感染甲肝病毒的细胞：用维持液维持培养感染甲肝病毒的细胞，每天更换维持液，维持培养14～28天；步骤四：检测病毒感染复制情况：从第14天开始，每天抽样，采用免疫荧光法测定细胞中的病毒抗原，检测病毒感染复制情况；步骤五：终止培养：在病毒感染、复制高峰期终止培养，弃维持液，收获培养的感染细胞；步骤六：收集细胞悬液：采用无菌注射用水或低渗溶液溶胀破裂细胞，并辅以搅拌，将细胞从微载体上剥离，筛网分离微载体，收集细胞悬液；步骤七：将细胞悬液提取、纯化。