[发明专利]一种斑马鱼胚胎DNA错配修复功能活性的分析方法及其应用

摘要

本发明涉及一种斑马鱼胚胎DNA错配修复功能活性的分析方法，以及此分析方法在环境化合物DNA错配修复功能毒性评价上的应用。该方法包括：以质粒pGEM-EGFP制备单链DNA分子；用单链DNA分子同线性化的质粒pGEM-EGFP以及质粒pGEM-(mt)EGFP分别制备同源和异源双链核酸分子；将同源和异源双链核酸分子分别显微注射至1-细胞期的斑马鱼胚胎中；对胚胎DNA错配修复功能活性进行定量。该发明首次在斑马鱼胚胎水平上建立了DNA错配修复功能活性分析方法，并且成功地将其应用于环境化合物DNA错配修复功能毒性评价，这对于环境化合物人群健康风险以及致癌风险评价具有重大意义。同时，应用斑马鱼评价化合物DNA错配修复功能毒性，兼具操作简单、直观快捷、受试化合物给药简单、用量少等优点。

主权项

一种斑马鱼胚胎DNA错配修复功能活性的分析方法，其特征在于，所述分析方法包括以下步骤：1)以质粒pGEM‑EGFP制备单链DNA分子，所述质粒pGEM‑EGFP能正常表达绿色荧光蛋白；2)用步骤1)中获取的单链DNA分子同线性化的质粒pGEM‑EGFP以及pGEM‑(mt)EGFP分别制备同源和异源双链核酸分子，其中所述质粒pGEM‑(mt)EGFP的绿色荧光蛋白基因内第58个三联密码子处存在一无义突变，不能正常表达绿色荧光蛋白；3)将制备好的同源和异源双链核酸分子分别显微注射至1‑细胞期的斑马鱼胚胎中；4)对胚胎DNA错配修复功能活性进行定量。