[发明专利]聚乙二醇修饰蛋白质的修饰位点分析方法

摘要

本发明属于生物医药领域，涉及聚乙二醇修饰蛋白质修饰位点的分析方法，至少包括蛋白质组学工具酶酶解、高效液相色谱分离使序列上只包括含量上占绝对优势的实际修饰位点残基且不包括可能但非实际修饰位点残基且连接聚乙二醇部分的酶解片段与各序列上只包括一个含量上次要的实际修饰位点残基且不包括可能但非实际修饰位点残基且连接聚乙二醇部分的酶解片段彼此分离、峰面积归一法确定占绝对优势修饰位点比例、N端序列测定确定占绝对优势修饰位点位置等步骤。采用这一分析方法，可更加方便、快捷、准确、低成本的确定聚乙二醇修饰蛋白质中占修饰位点的分布与比例。

主权项

聚乙二醇修饰蛋白质的修饰位点分析方法，至少包括如下步骤：1)酶解：至少一次酶解，以在完全酶解与不存在非特异性酶解的条件下使各可能的修饰位点分布于不同的理论酶解片段中；2)高效液相色谱分离：在每次酶解后至少一次高效液相色谱分离，以最终使实际连接聚乙二醇部分的酶解片段比较实际未连接聚乙二醇部分的酶解片段分布于不同的色谱峰中，且最终至少使序列上只包括含量上占优势的实际修饰位点残基且不包括可能但非实际修饰位点残基且连接聚乙二醇部分的酶解片段比较各序列上只包括同一个含量上次要的实际修饰位点残基且不包括可能但非实际修饰位点残基且连接聚乙二醇部分的酶解片段，分布于不同的色谱峰中；3)确定修饰位点比例：对序列上只包括含量上占优势的实际修饰位点残基且不包括可能但非实际修饰位点残基且连接聚乙二醇部分的酶解片段与各序列上只包括同一个含量上次要的实际修饰位点残基且不包括可能但非实际修饰位点残基且连接聚乙二醇部分的酶解片段在2)的色谱分离中最终对应的色谱分离峰进行峰面积加和处理，不同次色谱分离得到的色谱峰的峰面积需按同一次色谱分离的峰面积进行折算后再加和，并确定其中峰面积最大的色谱分离峰占峰面积加和的比例，以确定占优势的实际修饰位点在全部修饰位点中所占比例；4)确定修饰位点位置：收取序列上只包括含量上占优势的实际修饰位点残基且不包括可能但非实际修饰位点残基且连接聚乙二醇部分的酶解片段所最终对应的色谱分离峰的样品进行N端序列测定，与理论酶解序列进行比对确定占优势的实际修饰位点在蛋白质序列中的位置。