[发明专利]一种开放式培养甘蔗脱毒种苗的方法

摘要

本发明涉及一种开放式培养甘蔗脱毒种苗的方法，包括种茎热水处理、抑菌剂的配制、器皿消毒、接种操作、诱导培养、增殖培养、生根培养和瓶苗移栽。采用本发明的开放式培养甘蔗脱毒种苗的方法，培养基无需高压灭菌，接种只要在自然、开放的环境中进行，不需要超净工作台，从根本上简化组培环节，降低组培成本；开放组培与传统组培对比，至少可以降低成本20%以上。而且操作简单，只要按不同的培养基配方配制后，再加上抑菌剂即可。投资少，实用性强，推广性好，适合在蔗农中推广。

主权项

一种开放式培养甘蔗脱毒种苗的方法，包括种茎热水处理、抑菌剂的配制、器皿消毒、接种操作、诱导培养、增殖培养、生根培养、瓶苗移栽，其特征在于：　　（1）种茎热水处理：选择无病虫害植株，在蔗茎中部取具有饱满蔗芽的双芽茎段，洗净并用800～1000倍稀释的多菌灵浸泡25～30min，清水洗净后入恒温水浴锅中，50～52℃热水处理28～30min，期间不断搅拌使蔗茎受热均匀；然后，取出蔗茎用泥炭土覆盖，厚度以刚露出蔗芽为宜，保持湿润，并在25～38℃和1200 ～1500 lx光照条件下培养；　  （2）抑菌剂的配制：使用益培隆杀菌剂配制抑菌剂１号和抑菌剂2号；抑菌剂１号的配制方法：在益培隆杀菌剂A瓶中加入10～20ml蒸馏水稀释后与B瓶混合，再用蒸馏水定容到100 ml，即为抑菌剂１号；抑菌剂2号的配制方法：在益培隆杀菌剂A瓶中加入10～20 ml蒸馏水稀释后与B瓶混合，再加成熟蒜头的汁液20～60 ml，用蒸馏水定容到100 ml,即为抑菌剂2号；　  （3）器皿消毒：将培养瓶及瓶盖在体积比为0.3%～0.5%抑菌剂１号的水溶液中浸泡不少于１０h备用；　  （4）接种操作：接种室内用紫外灯照射消毒，接种的器具用体积比为75%的酒精消毒后,放在体积比为0.5％的抑菌剂１号水溶液中浸泡不少于0.5h,接种过程始终浸泡在体积比为0.5％的抑菌剂１号水溶液中；　  （5）诱导培养：取健壮的甘蔗植株，从最高肥厚带往下30 cm处切下，用体积比为75%的酒精表面消毒；剥离外层叶鞘，取含生长点0.5～1cm长的芽尖，接种到诱导培养基；培养室温度为25～28 ℃，光照12h，光照强度为1200 ～ 1500 lx；所述诱导培养基为MS＋6‑BA 2.0 mg/L＋KT 0.5～2.0 mg/L+抑菌剂2号5 ml/L＋蔗糖30 g/L+琼脂粉3.5 g/L，pH5.8；所述MS培养基为1962年，Murashige和Skoog公开的MS培养基；所述BA，指6－苄氨基嘌吟；所述KT，指6－糠氨基嘌吟；（6）增殖培养：将外植体诱导出的丛生芽接种到MS＋6‑BA1.0 mg/L＋KT 0.5～2.0 mg/L+抑菌剂2号3 ml/L＋蔗糖30g/L+琼脂粉3.5g/L的增殖培养基中，15天转接一次；培养室温度为25～28 ℃，光照12h，光照强度为1200 ～ 1500 lx；　　 （7）生根培养：当苗高不低于2.0cm、且茎粗不小于0.2cm，转入1/2MS+NAA 3 mg/L+活性炭500 mg/L+抑菌剂2号3ml/L＋蔗糖40 g/L+琼脂粉3.5 g/L的生根培养基中，20～30天移栽；培养室温度为25～28 ℃，光照12h，光照强度为1200 ～1500 lx；（8）瓶苗移栽：将生根苗取出后，洗净根部的培养基，用800倍的多菌灵浸泡30min后移栽至穴盘，放到大棚内，移栽的基质为河沙，种植后浇透水，大棚上层用50%以上的遮光网遮盖，移栽的环境温度为20～32℃。