[发明专利]芍药高频胚性愈伤组织分化的培养基及培养方法

摘要

本发明涉及一种芍药高频胚性愈伤组织分化的培养基及培养方法。所述培养方法，包括选材、种胚消毒及分离、培养基配制及愈伤组织分化和胚性芽分化的步骤。所述芍药愈伤组织分化培养基，是在改良1/2MS基本培养基中添加NAA0.5-2.0mg/L，TDZ0.1-0.5mg/L，蔗糖30g/L，琼脂6g/L，pH为5.8；所述芍药胚性芽分化培养基，是在改良1/2MS基本培养基中添加TDZ1.0-5.0mg/L，蔗糖100g/L，琼脂6g/L，pH为5.8。本发明具有取材方便，出愈率高、褐化率低，胚性芽分化率高的优点，能够满足转基因研究应用。

主权项

一种芍药高频胚性愈伤组织培养方法，包括以下步骤：(1) 选材：选生长健康、饱满、绿熟的种子；(2) 种胚消毒及分离：将种子用75%酒精灭菌30 s，无菌水冲洗干净后0.1%升汞灭菌8 min，无菌水冲洗干净后浸泡于水中，依次将种皮、胚乳剥离，获得待接的种胚；(3) 培养基配方及培养方法：①愈伤组织分化：在改良1/2MS基本培养基中添加NAA 0.5‑2.0mg/L + TDZ0.1‑0.5mg/L，附加蔗糖30 g/L，琼脂 6 g/L， pH为5.8制得愈伤组织分化培养基；将种胚接入愈伤组织分化培养基，温度25±2℃，暗培养两个月；②胚性芽分化：在改良1/2MS基本培养基中添加TDZ 1.0‑5.0mg/L，附加蔗糖100 g/L，琼脂 6 g/L，pH为5.8制得胚性芽分化培养基；将经暗培养的组织继续在温度25±2℃，光照强度1200lx±100lx，光照时间 12h/d下培养；其中改良1/2MS基本培养基配方是将MS培养基中的大量元素含量改良为KNO3 62.5 mg/L、NH4NO3 125 mg/L、MgSO4·7H2O 62.5 mg/L、KH2PO4 137.5 mg/L、CaCl2·2H2O 125 mg/L，其它微量元素、铁盐与有机成分含量不变。