[发明专利]FXYD6胞内区蛋白的表达和纯化方法无效
| 申请号： | 201110259079.6 | 申请日： | 2011-09-02 |
| 公开（公告）号： | CN102978210A | 公开（公告）日： | 2013-03-20 |
| 发明（设计）人： | 周宁新 | 申请（专利权）人： | 周宁新 |
| 主分类号： | C12N15/12 | 分类号： | C12N15/12;C12N15/63;C12N15/11;C12N1/21;C07K14/47;C07K1/22 |
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| 地址： | 100088 北*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种FXYD6胞内区蛋白的表达和纯化的方法，是采用核苷酸序列如SEQ ID No：2和SEQ ID No：3所示的引物对、利用PCR技术扩增FXYD6胞内区序列后，将扩增出的FXYD6胞内区序列插入到表达载体pGEX-6P-1中，构建重组载体pGEX-6P-1-FXYD6胞内区；再将重组载体转化于宿主细胞中，并在宿主细胞中表达FXYD6胞内区重组蛋白；表达的重组蛋白进行鉴定后，通过亲和层析柱进行纯化，经过纯化的蛋白再通过SDS-PAGE分析鉴定纯度。本发明提供了FXYD6胞内区的纯化蛋白，进一步可应用于制备FXYD6蛋白胞内区的单克隆抗体。为进一步研究FXYD6组织分布提供了有利工具。 | ||
| 搜索关键词： | fxyd6 胞内区 蛋白 表达 纯化 方法 | ||
【主权项】：
一种FXYD6胞内区蛋白的表达和纯化的方法，其特征在于，步骤如下：a.采用核苷酸序列如SEQ ID No：2和SEQ ID No：3所示的引物对，利用PCR技术扩增FXYD6胞内区基因；b.将扩增出的FXYD6胞内区基因插入到已用BamH I和Xho I双酶切后的表达载体pGEX‑6P‑1中，构建重组载体pGEX‑6P‑1‑FXYD6胞内区；c.将重组载体pGEX‑6P‑1‑FXYD6胞内区转化于宿主细胞中，并在宿主细胞中表达FXYD6胞内区蛋白；d.表达的FXYD6胞内区蛋白采用蛋白质免疫印记进行鉴定，之后通过亲和层析柱进行纯化，经过纯化的蛋白再通过聚丙烯酰胺凝胶电泳分析鉴定纯度。
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