[发明专利]一种脐带血分离二联袋分离造血干细胞的方法

摘要

本发明涉及一种脐带血分离二联袋分离造血干细胞的方法，采用主袋、转移袋分步分离红细胞和血浆至转移袋，添加冷冻保护液将细胞转移至细胞冷冻袋并最终冷冻储存。本方法采用离心的方法实现造血干细胞的分离，采用的分离转移袋结构简单实用，整体分离工艺简便，全密闭的分离，降低污染，能安全有效地浓缩造血干细胞的储存体积，并尽可能的提高造血干细胞的回收率。

主权项

一种脐带血分离二联袋分离造血干细胞的方法，包括200ml主袋(1)、150ml转移袋(2)，所述主袋上连通有进料管(7)、转移接管(3)，进料管上设有进料控制阀(10)和0.22um过滤器(11)，转移接管上连通有并联的进血管(6)和转移管(5)，进血管上设有进血控制阀(9)和血液过滤网(13)，转移管上连通转移袋(2)，且转移管上还设有转移控制阀(8)，转移接管上还设有取样口(12)，所述主袋上还设有外接细胞冷冻袋的细胞排出口(4)，其特征在于分离造血干细胞的方法包括以下步骤：(a)将脐带血采集袋中的血液混匀后经带血液过滤网的进血管转移至200ml主袋中，转移后将进血控制阀关闭；(b)从进料管加入采集血量1/5体积的羟乙基淀粉HES至主袋中，转移后将进料控制阀关闭；(c)将脐带血和羟乙基淀粉HES混匀，将脐带血分离二联袋整体至离心机中使主袋接口朝下，以400转/分钟的转速离心7分钟；(d)将离心后置于主袋最下层的红细胞通过转移接管和转移管转移至150ml转移袋中，转移后将转移控制阀关闭；(e)将主袋所剩的血液成分重新混匀，将脐带血分离二联袋整体至离心机中使主袋接口朝上，以1500转/分钟的转速离心15分钟；(f)打开转移控制阀，通过血液分浆夹将离心后置于主袋上层的2/3血浆经转移接管和转移管转移至150ml转移袋中；(g)混匀主袋中余下的富含造血干细胞的浓缩血，从转移接管上的取样口取1ml的样品，计算有核细胞总数、细胞活率，检测细胞集落形成能力和CD34+细胞占有核细胞的百分比；(h)通过带0.22um过滤器的进料管加入浓缩血1/4体积的4℃预冷的细胞冷冻保护液，混匀； (i)混匀后立即将细胞排出口上接细胞冷冻袋，将上述步骤主袋中的由细胞冷冻保护液保护的浓缩血全部转移至细胞冷冻袋中；(j)将细胞冷冻袋接口封口后，从脐带血分离二联袋上分离，放入程控降温仪中缓慢降温至‑80℃后置入液氮罐中长期保存；(k)将转移袋中的混合血液成分混匀后转移回至主袋中，通过主袋上的取样口取30ml留样，取20ml做细菌检测和病原微生物的检测。