[发明专利]一种鸡传染性法氏囊病基因工程亚单位疫苗的制备和应用

摘要

本发明涉及一种鸡传染性法氏囊病基因工程亚单位疫苗的制备和应用。本发明人优化了鸡传染性法氏囊病病毒VP2蛋白的重组表达方法，有效提高了VP2蛋白的表达产量，确保了表达产物与天然蛋白的一致性。本发明的方法工艺简单、成本低廉，可高效稳定地获得可安全使用的鸡传染性法氏囊病病毒VP2蛋白亚单位疫苗。

主权项

一种重组表达鸡传染性法氏囊病病毒VP2蛋白亚单位的方法，其特征在于，该方法包括：(1)提供改造的VP2蛋白亚单位编码基因；其中，在所述的VP2蛋白亚单位编码基因的5’端起始密码子ATG之前添加蛋白酶KEX2的切割序列，在所述的VP2蛋白亚单位编码基因的3’端添加终止密码子序列；(2)将(1)所述的VP2蛋白亚单位编码基因插入到酵母表达载体pPICZαA的α‑factor信号肽编码序列下游，获得重组表达载体；(3)将(2)的重组表达载体电转化毕赤酵母X‑33菌株，获得重组的毕赤酵母细胞；电转化条件为：0.2cm电转杯，电压2.0KV，电击时间5ms，质粒浓度为7‑10μg/10μL，感受态细胞100μL；电转化后快速加入1mL1M山梨糖醇，30℃复苏1小时；(4)将(3)的重组的毕赤酵母细胞进行重组表达，表达条件为：采用诱导培养基BMMY，培养基PH值为6.5±0.5，诱导温度为28.5±1℃，甲醇终浓度为0.5±0.2%(v/v)；从表达上清中获得鸡传染性法氏囊病病毒VP2蛋白亚单位；步骤(1)中，还在所述的蛋白酶KEX2的切割序列的5’端之前添加XhoI酶切位点序列；在所述的终止密码子序列的3’端添加NotI酶切位点序列；所述的改造的VP2蛋白亚单位编码基因的序列如SEQ ID NO:1所示。