[发明专利]一种利用PCR方法检测水体中蓝藻种类的方法

摘要

本发明公开了一种利用PCR方法检测水体中蓝藻种类的方法，该方法基于蓝藻16-23SrRNAITS基因片段，利用软件设计合理的PCR引物；对待检浓缩液中提取的蓝藻DNA基因片段进行PCR扩增；PCR产物的纯化和测序；利用NCBI中的Blast软件进行多重序列比对分析；对滇池不同时期3个代表性水样进行了检测分析：1223号水样序列与集胞藻(Synechocysitssp.)同源相关性达97%；722号水样与惠氏微囊藻(Microcystiswesenbergii)的同源相关性高达99%；另外，319号水样与浮游鱼腥藻(Anabaenaplanktonica)同源性高达99%。

主权项

一种利用PCR方法检测水体中蓝藻种类的方法，包括下列步骤：（1）基于蓝藻16‑23S rRNA ITS基因片段，应用引物设计软件设计如下，特异性扩增蓝藻16‑23S rRNA ITS基因寡聚核苷酸的PCR引物：ITSF：5’－ TGTACACACCGCCCGTCACACCA－3’ITSR：5’－GTGGATACCTAGGCACACAGAG－3’；（2）提取待检水样中蓝藻DNA基因片段；（3）以蓝藻DNA为模板，采用（1）中设计的引物，经PCR获得特异扩增蓝藻16‑23S rRNA ITS基因片段；（4）PCR产物的纯化和纯化产物TA克隆及测序，在NCBI中用Blast对所测定的核苷酸序列进行多重序列比对分析。