[发明专利]使用编码双链启动子一条链的引物的方法无效
| 申请号: | 201110204394.9 | 申请日: | 2003-11-21 |
| 公开(公告)号: | CN102268428A | 公开(公告)日: | 2011-12-07 |
| 发明(设计)人: | G·A·达尔;J·J·詹得里萨克 | 申请(专利权)人: | 震源技术公司 |
| 主分类号: | C12N15/10 | 分类号: | C12N15/10;C12Q1/68 |
| 代理公司: | 中国国际贸易促进委员会专利商标事务所 11038 | 代理人: | 罗菊华 |
| 地址: | 美国威*** | 国省代码: | 美国;US |
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| 摘要: | 本发明提供了通过使用编码双链启动子一条链的启动子引物获得环形单链DNA转录底物而由RNA聚合酶来制备对应于靶序列的转录产物的方法、组合物和试剂盒。本发明对于研究、诊断和治疗应用例如制备对应于mRNA的cDNA、制备有义或反义探针、检测基因或生物体特异性序列或制备RNAi等具有广阔的适用性。 | ||
| 搜索关键词: | 使用 编码 启动子 一条 引物 方法 | ||
【主权项】:
用于制备对应于靶核酸中的靶序列的转录产物的方法,该方法包括:(a)获得靶核酸;(b)获得有义启动子引物,该有义启动子引物包括含有有义转录启动子的5′‑端部分以及互补于靶的3′‑端部分;(c)使有义启动子引物与靶核酸退火,以形成靶核酸‑有义启动子引物复合体;(d)使靶核酸‑有义启动子引物复合体与DNA聚合酶在聚合反应条件下接触,以获得互补于靶序列的第一链cDNA;(e)获得第一链cDNA;(f)在连接条件下连接第一链cDNA,以获得含有义启动子的环形第一链cDNA;(g)获得反义启动子寡核苷酸;(h)使反义启动子寡核苷酸与含有义启动子的环形第一链cDNA退火,以获得环形转录底物;(i)获得环形转录底物;和(j)使环形转录底物与RNA聚合酶在转录条件下接触,其中获得转录产物。
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