[发明专利]一种低浓度的乌司他丁活性测定方法

摘要

本发明公开了一种低浓度的乌司他丁活性测定方法。该测定方法包括：根据待测样品的乌司他丁浓度，用1-20U/ml的已知浓度的乌司他丁为对照品，分别加入胰蛋白酶溶液保温，通过检测胰蛋白酶活性被乌司他丁抑制后的剩余活性来检测样品乌司他丁的含量，该胰蛋白酶的剩余活性用BAPNA(苯甲酰DL-精氨酸对硝基苯胺)为底物，利用分光度计测定405nm光吸收来测定。采用该方法，乌司他丁样品的检测灵敏度提升到1U/ml，可直接用于尿液样品的测定，有助于对患者病情的判断，并且可对乌司他丁生产、加工过程中各环节的低浓度样品进行测定，有效的配合乌司他丁生产的质量控制和工艺研究，提高产品的质量和收率。

主权项

1.一种低浓度的乌司他丁活性测定方法，其特征在于，包括如下步骤：1)用1-20U/ml的已知浓度的乌司他丁标准品为对照品；2)在已加入待测样品溶液的A_T管和已加入对照品的A_S管以及空白管A₀中分别加入胰蛋白酶溶液保温，实现乌司他丁对胰蛋白酶的抑制；3)测定未被乌司他丁抑制的胰蛋白酶的剩余活性：加入BAPNA(苯甲酰DL-精氨酸对硝基苯胺)底物溶液，保温10-60分钟，用20％三氯乙酸终止反应；4)另取二支试管，分别标记为A_s0、A_To，各加入缓冲液，再加入20％三氯乙酸终止液，然后分别加入步骤2所述的乌司他丁对照品及待测样品溶液，混匀作为参比管；5)A_T管、A_S管、A₀管、A_s0管、A_To管，10000rpm离心10-20分钟；6)离心上清，使用A_s0管校零，利用分光光度计测定各管405nm处的光吸收；7)根据所测吸收值按下式进行结果计算待测样品溶液：8)该样品实测值与对照品浓度偏差大于50％，需重新估计活性，参照步骤1到步骤7继续做检测，直到该样品实测值与对照品溶液浓度偏差小于50％。