[发明专利]一种表达重组人凝血因子Ⅶ的方法及其专用载体

摘要

本发明公开了一种高效表达重组人凝血因子VII的方法及其专用载体。该载体自上游至下游顺次包含人延伸因子1α亚基启动子EF-1α或巨细胞病毒即刻早期启动子CMV-IE，人凝血因子VII的cDNA基因，人工合成的内含子，内部核糖体进入位点IRES，谷氨酰胺合成酶基因GS或二氢叶酸还原酶基因DHFR，牛生长激素poly??A信号序列和质粒的复制结构域。对表达样品的检测结果证明，转染有本发明4种重组载体的CHO细胞能稳定、高效表达重组人凝血因子VII，平均表达量约为5-13mg/L，而且表达样品具有较高的促凝活性，表达产物能缩短血浆的凝血时间，通过活性计算，活性最高者相当于524％血浆FVII的活性。本发明将在重组人凝血因子VII的高效表达中发挥重要作用，应用前景广阔。

主权项

一种用于高效表达重组人凝血因子VII的专用载体，包含自上游至下游顺次排列的以下表达元件：1)启动子，选用人延伸因子1α亚基启动子(EF 1α)或巨细胞病毒即刻早期启动子(CMV IE)，优选为EF 1α启动子；2)人凝血因子VII的cDNA基因；3)pIRESneo载体中的人工合成的内含子序列(IVS)；4)内部核糖体进入位点(IRES)；5)筛选基因，选用谷氨酰胺合成酶基因(GS)或二氢叶酸还原酶基因(DHFR)，优选为GS基因；6)牛生长激素poly A信号序列；7)质粒的复制结构域。