[发明专利]一步法引入外源基因的四膜虫表达载体及构建方法和应用无效
| 申请号： | 201110162653.6 | 申请日： | 2011-06-16 |
| 公开（公告）号： | CN102286530A | 公开（公告）日： | 2011-12-21 |
| 发明（设计）人： | 袁冬霞;缪炜 | 申请（专利权）人： | 中国科学院水生生物研究所 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/66;C07K14/435 |
| 代理公司： | 武汉宇晨专利事务所 42001 | 代理人： | 王敏锋 |
| 地址： | 430072 湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种一步法引入外源基因的四膜虫表达载体及构建方法和应用。利用质粒HSP702-GFP和THX-HGFP，通过PCR和酶切连接等方法构建中间载体TH-HGFP；利用质粒TH-HGFP、PET23a-GST和pCDNA3.1-FLAG，通过PCR和酶切连接等方法分别构建中间载体TH-HIS-HGFP、TH-GST-HGFP和TH-FLAG-HGFP；利用上述中间载体分别与质粒pD5H8，通过PCR和酶切连接等方法构建四膜虫表达载体：pD5H8-HGFP，pD5H8-HIS-HGFP，pD5H8-GST-HGFP，pD5H8-FLAG-HGFP。该系列载体均含有绿色荧光筛选标记HGFP，可用于重组子的高通量筛选；该系列载体可替代盒式结构HGFP两侧均含反向的I-SceI稀有酶切位点，引入外源基因时，将带I-SceI接头的外源基因片段与用I-SceI处理后的该系列载体一步连接，即可得到含外源基因的四膜虫表达载体。本发明操作方便快捷，引入外源基因的四膜虫表达载体转染四膜虫后可实现外源基因的高效表达。 | ||
| 搜索关键词： | 一步法 引入 基因 四膜虫 表达 载体 构建 方法 应用 | ||
【主权项】：
一种一步法引入外源基因的四膜虫转基因表达载体pD5H8‑HGFP，其序列为SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列。
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