[发明专利]一种寡核苷酸基因芯片及其在检测多种病菌方面的应用

摘要

本发明一种寡核苷酸基因芯片及其在检测多种病菌方面的应用。所述寡核苷酸基因芯片的探针可分别与结核分枝杆菌（M．tuberculosis）、牛分枝杆菌（M.bovis）、鸟分枝杆菌（M.avium）、副结核分枝杆菌（M.paratuberculosis）和布氏杆菌（Brucella）的PCR扩增产物进行杂交反应；所述探针分别具有SEQIDNO：25、SEQIDNO：31、SEQIDNO：35、SEQIDNO：37和SEQIDNO：39所示的核苷酸序列。本发明所述基因芯片应用于检测所述病菌具有良好的重复性，批间批内变异系数CV值％均小于15％。对致病菌待测样本的检测表现出了高的准确度，表明该方法特异性良好，灵敏度高，实现了高通量、平行化检测，检测结果快速、准确，从核酸制备到完成检测，整个过程仅需6～8h，在制备病原检测、进出口检疫、流行病学分析用的试剂和产品等方面具有广阔的前景。

主权项

一种应用于检测样本中多种病菌的寡核苷酸芯片，包括基底和固定于该基底上的探针，其特征在于所述探针可分别与结核分枝杆菌（M．tuberculosis）、牛分枝杆菌（M. bovis）、鸟分枝杆菌（M. avium）、副结核分枝杆菌（M. paratuberculosis）和布氏杆菌（Brucella）的PCR扩增产物进行杂交反应；所述探针是以Genebank上已公布的M．tuberculosis H37Rv、M. bovis AN5、M. avium、M. paratuberculosis和Brucella五种细菌的基因序列，分别选择M．tuberculosis H37Rv的mpt40基因、M. bovis AN5的pncA基因、M. avian的gyrB基因、M. paratuberculosis的IS‑900基因、Brucella的Alkb基因序列为参考序列，设计引物，筛选得到；所述引物分别具有SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4 ；SEQ ID NO：9和SEQ ID NO：10；SEQ ID NO：11和SEQ ID NO：12；SEQ ID NO：17和SEQ ID NO：18；SEQ ID NO：23和SEQ ID NO：24所示的核苷酸序列；所述探针分别具有SEQ ID NO：25、SEQ ID NO：31 、SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：37和SEQ ID NO：39所示的核苷酸序列；上述引物中所有下游引物在5’端进行Cy3标记；所述探针在3’端进行氨基修饰。