[发明专利]一种提取纯化人体脱落细胞DNA的方法

摘要

本发明公开了一种提取纯化人体脱落细胞DNA的方法。该方法包括以下步骤：1)预处理：将人体脱落细胞与预处理裂解液接触，去除生物细胞所粘附的固体物质，得到粗裂解液；2)核酸吸附：将步骤1)得到的粗裂解液与裂解结合液以及磁珠悬浮液混合，形成含有磁性纳米微球-DNA的复合体的溶液体系，收集所述溶液体系中的磁性纳米微球-DNA的复合体；3)洗涤：将步骤2)得到的磁性纳米微球-DNA的复合体依次用洗涤液I、洗涤液II洗涤，然后用洗脱液溶出DNA。本发明提供的方法提取DNA的效率可达90％，提取的DNA可应用于STR复合扩增、DNA测序、DNA定量等下游分析操作。

主权项

提取纯化DNA的方法，包括以下步骤：1)预处理：用预处理裂解液裂解生物样品，得到粗裂解液，所述生物样品是人体脱落细胞；其中，预处理裂解液：pH为7.4，溶剂是水，溶质是如下终浓度的物质：10mM Tris‑HCl，0.5g/100ml的十二烷基磺酸钠SDS，1mM的EDTA和50mM的NaCl，0.5mg/ml的蛋白酶K；2)核酸吸附：将步骤1)得到的粗裂解液与裂解结合液以及磁珠悬浮液混合，形成含有磁性纳米微球‑DNA的复合体的溶液体系，收集所述溶液体系中的磁性纳米微球‑DNA的复合体；其中，裂解结合液：pH为6.4，溶剂是水，溶质是如下终浓度的物质：50mM的Tris‑HCl，3M的异硫氰酸胍，1％(体积百分比)的Triton X‑100，0.5g/100ml的3‑(3‑胆胺丙基)‑二甲氨基‑1‑丙磺酸，10mM的EDTA以及15％(体积百分含量)的乙醇；磁珠悬浮液：每ml磁珠悬浮液中的纳米级硅包被磁性微球为50mg，其余为水，纳米级硅包被磁性微球的直径是60nm；3)洗涤：将步骤2)得到的磁性纳米微球‑DNA的复合体依次用洗涤液I、洗涤液II洗涤，然后用洗脱液溶出DNA，得到纯化的DNA；其中，洗涤液I：溶剂是水，溶质是如下终浓度的物质：4M的盐酸胍，25％(体积百分含量)的乙醇和10mM的EDTA；洗涤液II：75％(体积百分含量)乙醇水溶液；洗脱液：是TE溶液，所述TE溶液的pH为8.0，溶剂是水，溶质是10mM的Tris‑HCl，1mM的EDTA。