[发明专利]一种制备共固定化葡萄糖氧化酶/过氧化氢酶微球的方法

摘要

一种制备共固定化葡萄糖氧化酶/过氧化氢酶微球的方法，属于固定化酶技术领域。本发明以壳聚糖-精氨酸阴离子微球为载体，加入GOD和CAT混合溶液及戊二醛，经交联反应、过滤、洗涤、冷冻干燥，制备出共固定化GOD和CAT微球。本发明具有方法反应条件温和，酶活力回收较高，固定化酶半衰期长，操作简单，成本较低，清洁安全等特点。采用本发明方法制备出的产品，可广泛应用于医药、食品，水处理、水泥等行业中。还能作为除葡萄糖、脱氧、杀菌剂、葡萄糖定量分析试剂等。

主权项

一种制备共固定化葡萄糖氧化酶/过氧化氢酶微球的方法，其特征在于具体方法步骤如下：(1)制备壳聚糖‑精氨酸阴离子微球依据《应用化学》2009年7月第26卷第7期公开的“壳聚糖‑精氨酸树脂固定化胰凝乳蛋白酶及其性质”一文，制备出壳聚糖‑精氨酸阴离子微球；(2)配制GOD和CAT混合溶液第(1)步完成后，按照GOD∶CAT的活力比为1∶1～6的比例，将GOD和CAT溶解于pH 3～8的0.2mol/L磷酸氢二钠‑柠檬酸缓冲溶液中，收集含GOD和CAT的溶解液；(3)GOD和CAT共固定化第(2)步完成后，按照第(1)步制备出的壳聚糖‑精氨酸阴离子微球的质量∶第(2)步收集的含GOD和CAT的混合溶液的体积比为1g∶3～8mL的比例，先将壳聚糖‑精氨酸阴离子微球分散于含GOD和CAT的混合溶液中，搅拌吸附30～60分钟后，再按照戊二醛体积浓度为2.5％的戊二醛溶液∶含GOD和CAT的混合溶液的体积比为1∶5～10的比例，将戊二醛溶液加入分散液中，在4～10℃下，反应2～3小时，用于GOD和CAT的共固定化，收集反应液；(4)制备共固定化GOD/CAT微球第(3)步完成后，将第(3)步收集的反应液，进行过滤，弃滤液，收集滤渣，对于收集的滤渣，用pH 3～8的0.2mol/L磷酸氢二钠‑柠檬酸缓冲溶液液洗涤3～5次，分别收集洗涤液和洗涤渣，对于收集的洗涤渣，在温度为‑40～‑50℃、真空度为20～50Pa的条件下，进行冷冻干燥24～30小时，就制备出壳聚糖‑精氨酸树脂共固定化GOD/CAT微球。