[发明专利]一种以微生物发酵制备三氯蔗糖的方法

摘要

本发明涉及一种以微生物发酵制备三氯蔗糖的方法，包括：在水苏糖中加入酵母菌，发酵培养后离心分离得甘露三糖；然后加入吡啶和氯化亚砜，经加热冷却，分离得二氯甘露三糖；以二氯甘露三糖作为唯一碳源进行大肠杆菌的筛选培养，筛选出优良菌株后再进行扩大培养；然后将预先制备好的四氯水苏糖加入到发酵培养基中，接入扩大培养的菌株，于36～37℃，通气搅拌5-25分钟，离心除菌种后超滤除蛋白，浓缩结晶得三氯蔗糖。该制备工艺简单，操作平稳，收率高；反应均为通用标准设备，投资少；每步溶剂和附料可以回收，不仅成本降低而且对环境友好。

主权项

一种以微生物发酵制备三氯蔗糖的方法，包括：(1)在10‑15wt％的水苏糖溶液中加入为溶液的1‑5wt％酵母菌(Sac‑charomycescerevisiae)，于32～34℃发酵5～10h，离心除菌，取上清液经硅胶层析分离得甘露三糖；(2)将甘露三糖与吡啶按摩尔比1∶5～15混合溶解，滴加氯化亚砜，然后升温到100℃，保温3‑15min，冷却后蒸除溶剂，分离得二氯甘露三糖；其中，甘露三糖与氯化亚砜的摩尔比为1∶5‑15；(3)将大肠杆菌K12菌株(Escherichia coli K12)先进行紫外及亚硝酸复合诱变，然后按1‑10％接种量接种到M9培养基，并加入为培养基总体积百分比1～3％的二氯甘露三糖，于37℃筛选培养24‑48h，选取生长良好的菌种，然后接种到液体培养基进行扩大培养，37℃培养24‑48h，得扩大培养后的菌种；(4)将水苏糖与吡啶按摩尔比1∶5～10混合，于‑5～0℃滴加氯化亚砜，然后升温至100～110℃保温4～6min，冷却分离得四氯水苏糖；其中，水苏糖与氯化亚砜的摩尔比为1∶6～8；(5)最后在M9发酵培养基中加入四氯水苏糖，并按1‑10％的接种量接入步骤(3)所得扩大培养后的菌种，于36～37℃，通气搅拌5‑25分钟，离心除菌种后超滤除蛋白，浓缩结晶得三氯蔗糖。