[发明专利]一种用于快速检测马铃薯Y病毒的试剂盒及检测方法

摘要

本发明涉及病毒检测领域，具体涉及马铃薯Y病毒(Potato virus Y，简称PVY)的快速高灵敏检测试剂盒及其检测方法。该快速检测试剂盒包含采样管、漂洗管、核酸变性管、扩增检测管、阴性对照管、阳性对照管、快速干燥液、分别封装于无菌袋中的FTA膜片、研磨棒、牙签和吸管等，形成的检测方法简化了操作步骤，降低了实验成本，在田间或室内具有更强的实用性。

主权项

一种用于快速检测马铃薯Y病毒的试剂盒，其特征在于包含：(1)采样管，用来盛放、研磨待检样品；(2)漂洗管，内装灭菌蒸馏水；(3)核酸变性管，内装TE缓冲液；(4)扩增检测管，内装扩增反应液和染料；(5)阴性对照管，内装无烟草花叶病毒核酸的FTA膜片；(6)阳性对照管，内装吸附了烟草花叶病毒核酸的FTA膜片；(7)快速干燥液，为亲水性且易挥发的醇类物质；(8)分别封装于无菌袋中的FTA膜片、研磨棒、牙签和吸管；所述TE缓冲液含10mM Tris‑HCl和1mM EDTA，pH8.0所述的扩增反应液组成成分如下：如SEQ ID NO：1所示的上游引物1和如SEQ ID NO：2所示的下游引物1各1～2μM，如SEQ ID NO：3所示的上游引物2和如SEQ ID NO：2所示的下游引物2各0.1～0.4μM，dATP、dTTP、dGTP和dCTP各0.8～2.0mM，MgCl2 4～10mM，甜菜碱0.6～1.2M，Tris‑HCl 10～40mM，KCl 10～20mM，MgSO4 1～4mM，(NH4)2SO4 6～12mM，Triton X‑100 0.05％～1.0％(W/V)，反转录酶1～20U，Bst DNA聚合酶2～20U；所述的染料是氯化锰与钙黄绿素形成的配合物，或者是核酸染料。