[发明专利]基于重组大肠杆菌SOS效应的水质遗传毒性检测方法

摘要

本发明公开了一种基于重组大肠杆菌SOS效应的水质遗传毒性检测方法，包括：将重组大肠杆菌贮藏物复苏活化、培养，得大肠杆菌检测液；将待测水样与检测液接触，同时设立对照；将接触后的检测液进行离心、超声破碎等后处理，检测待测水样的荧光强度比值；采用相同的方法测得不同浓度的Cr6+溶液与检测液接触后的荧光强度比值；绘制荧光强度比值对Cr6+浓度的标准曲线，将水样的荧光强度比值代入，以Cr6+浓度表示该水样的水质毒性。本发明无致病风险、培养及操作简便易行、检测灵敏度较高、成本低廉、最终结果以Cr6+当量浓度表示，可与其他生物检测方法结果相比较，适用于环境样品的遗传毒性快速检测。

主权项

一种基于重组大肠杆菌SOS效应的水质遗传毒性检测方法，其特征是包括以下步骤：（1）制备大肠杆菌检测液a.将重组大肠杆菌贮藏物用改良的LB液体培养基进行培养，使其复苏活化；b.将步骤a得到的复苏活化液加入到LB液体培养基中进行振荡培养，培养至菌液OD值为0.3‑0.5，得大肠杆菌检测液； （2）将富集的待测水样与大肠杆菌检测液混合接触，同时设立添加相同体积纯溶剂的大肠杆菌检测液作为对照； （3）将与待测水样接触过的大肠杆菌检测液和对照组的大肠杆菌检测液分别进行离心分离，收集菌体，菌体用PBS缓冲液洗涤后利用超声法破碎菌体，得菌体破碎物；（4）将菌体破碎物离心,收集上清液，利用荧光光谱仪检测菌体的发射荧光强度，得待测水样的荧光强度比值，待测水样的荧光强度比值=与待测水样接触的菌体的发射荧光强度/对照组菌体的发射荧光强度；（5）用不同浓度的Cr6+溶液分别与大肠杆菌检测液接触，采用上述（2）、（3）、（4）相同的方法测得不同Cr6+溶液的荧光强度比值；（6）以Cr6+浓度作横坐标，以荧光强度比值为纵坐标，绘制荧光强度比值对Cr6+浓度的标准曲线；（7）将待测水样的荧光强度比值代入标准曲线，以Cr6+浓度表示该水样的水质毒性。