[发明专利]利用靶信号产生引物进行的靶检测

摘要

本发明涉及一种利用靶信号产生引物进行的靶检测。本发明通过在聚合酶链式反应（PCR）中使用的引物内引入双重相互作用性标记，使靶以及信号均得到扩增，并无需使用复杂的寡核苷酸，利用聚合酶链式反应（PCR）也可进行实时靶检测。本发明摆脱以往的实时聚合酶链式反应（PCR）方法的顽固的问题以及缺点。本发明仅利用标记引物成功地进行实时靶检测。并且，本发明不仅在液相还可以在固相中得到表示靶核酸序列存在的强信号。

主权项

一种利用靶信号产生引物从DNA或者核酸混合物中检测靶核酸序列的方法，其特征在于，包括以下的步骤：步骤(a)，使所述靶核酸序列与所述靶信号产生引物进行杂交，该靶信号产生引物包含：(i)杂交核苷酸序列，其与所述靶核酸序列互补，以及(ii)报道分子及猝灭分子，其中所述报道分子和所述猝灭分子互相隔开6－40个核苷酸；其中所述靶信号产生引物不具有发夹环结构；在所述靶信号产生引物未与所述靶核酸序列杂交的情况下，该报道分子及该猝灭分子三维地互相邻近而不借助于发夹环结构，从而所述猝灭分子猝灭从该报道分子发出的信号；在所述靶信号产生引物与靶核酸序列杂交的情况下，该报道分子及该猝灭分子三维地隔开，从而所述猝灭分子不猝灭从所述报道分子发出的信号，由此在不切割靶信号产生引物的情形下、在延伸所述靶信号产生引物之前产生并得到指示所述靶核酸序列存在的信号；步骤(b)，在引物延伸条件下将步骤(a)的结果物与模板依赖性核酸聚合酶进行接触，从而诱导所述靶信号产生引物的3’‑末端的3’‑延伸反应；其中靶信号产生引物的延伸反应允许掺入靶信号产生引物上的报道分子和猝灭分子到延伸产物中；以及步骤(c)，检测在未切割所述靶信号产生引物的情形下产生的指示所述靶核酸序列存在的信号，由此，所述信号表示在DNA或者核酸混合物中存在所述靶核酸序列。