[发明专利]用于重编程细胞的包含纯化的经修饰的RNA的RNA制剂

摘要

本发明提供了使用包含编码iPS细胞诱导因子的单链mRNA的纯化的RNA制剂重编程体细胞的组合物和方法。纯化的RNA制剂优选大体上不含RNA污染分子，所述RNA污染分子：i)可激活体细胞的免疫反应，ii)减少体细胞中单链mRNA的表达，和/或iii)激活体细胞中的RNA传感器。在某些实施方案中，纯化的RNA制剂大体上不含部分mRNA、双链RNA、未加帽的RNA分子和/或单链连缀mRNA。

主权项

一种用于将展示第一分化状态或表型的、选自哺乳动物成纤维细胞、角质形成细胞和内皮细胞的人或动物体细胞重编程为展示第二分化状态或表型的重编程诱导多能干细胞(iPS细胞)的方法，包括：a) 提供纯化的RNA制剂，所述纯化的RNA制剂包含体外合成的经修饰mRNA分子，所述经修饰mRNA分子包含至少一种经修饰的核苷替代至少一部分相应的未修饰的典型尿苷核苷，并且编码至少一种选自OCT4、SOX2、KLF4、LIN28、NANOG、MYC和c‑MYC的蛋白重编程因子，所述经修饰的核苷由未进一步修饰的假尿苷(Ψ)组成；其中所述纯化的RNA制剂采用包括以下的纯化过程产生：1) 用核糖核酸酶III (RNA酶III)处理体外合成的mRNA分子，使得产生短的RNA酶III消化产物，和从所述mRNA分子中纯化出所述短的RNA酶III消化产物；和/或2) 对所述体外合成的mRNA分子进行HPLC柱纯化；由此所述纯化过程除去污染物，所述污染物通过激活RNA传感器、诱导先天性免疫反应，诱导RNA干扰或直接或间接减少细胞中体外合成的mRNA的翻译而对细胞具有毒性；其中所述纯化的RNA制剂：i) 不含RNA污染分子，所述RNA污染分子包括双链RNA分子，其将激活足以阻止细胞存活和重编程细胞产生的免疫反应；和ii) 可重复引入或递送而不引发足以消除所述至少一种蛋白重编程因子的可检测表达的免疫反应；和b) 将所述纯化的RNA制剂引入或递送到所述细胞，和在使得所述细胞存活且产生展示第二分化状态或表型的iPS细胞的条件下培养所述细胞和重复所述引入或递送。