[发明专利]一种芯片法邻位连接技术

摘要

本发明的实施方式包括检测样品中目标分析物的方法，系统及探针。此方法利用对同一个分析物分子中的至少两个不同位点检测，或者两个相邻和接触分子的两个不同位点配对。这些不同位点是一单个分子不可缺少的一部分，或者由于多肽三维结构而彼此相近。通过一个更大分子修饰可形成至少一个可检测位点。检测一个目标分析物的方法包括将样品与一对探针结合，每个探针包含一个可特异结合目标分析物或标签的结合基，及一个寡核苷酸尾巴。这个寡核苷酸尾巴包含一个接近目标分析物结合基的PCR启动子区域，一个唯一与目标分析物结合基有关的条形码区域，一个互补于连接器寡核苷酸一个区域的连接器-杂交区域；将连接器寡核苷酸与探针上的连接器-杂交区域杂交，连接探针间的连接器-杂交区域；PCR扩增已连接的寡核苷酸尾巴；用基质固定的与探针条形码互补的寡核苷酸杂交扩增产物；消化任何DNA单链分子；用一个信号寡核苷酸杂交前一步骤的产物；检测信号，从而检测出样品中的分析物。

主权项

一种检测目标分析物的方法，包括：(i)获取怀疑包含一个目标分析物的样品；(ii)用第一探针和第二探针连接样品，其中第一探针和第二探针单独包含一个可特异结合目标分析物或标签的结合基，及一个寡核苷酸尾巴。所述的寡核苷酸尾巴包含一个相邻目标分析物结合基的PCR启动子区域，一个仅与目标分析物结合基有关的条形码区域，及一个互补于连接器寡核苷酸的连接器‑杂交区域，其中这个连接器‑杂交区域远离于目标分析物结合基，从而捕捉样品中的目标分析物；(iii)将连接器寡核苷酸杂交到所述第一探针及第二探针的连接器‑杂交区域上；(iv)将第一探针的连接器‑杂交区域连接到所述第二探针的连接器‑杂交区域上，从而连接所述第一探针及第二探针的寡核苷酸尾巴；(v)扩增第一PCR启动子区域间连接的所述寡核苷酸尾巴区域；(vi)用基质固定的寡核苷酸杂交扩增产物，其中基质固定的寡核苷酸包含一个互补于仅与第一探针目标分析物结合基有关的条形码的第一区域，及一个互补于仅与第二探针目标分析物结合基有关的条形码的第二区域；(vii)将步骤(v)产物与可特异切割单链DNA分子或区域的核酸酶连接，其中单链DNA有一个非碱基对3’端或一个5’端；(viii)将信号寡核苷酸杂交到步骤(vi)产物上，其中信号寡核苷酸包含一个核苷酸序列，这个核苷酸序列互补于第一探针，第二探针连接器‑杂交区域的一个核苷酸序列，或者互补于第一探针及第二探针连接器‑杂交区域的结合体，甚至包含一个标签；(ix)检测标签；从而检测样品中分析物的存在。