[发明专利]一种松鼠葡萄球菌脱皮毒素C蛋白的制备方法无效
| 申请号： | 201010623938.0 | 申请日： | 2010-12-31 |
| 公开（公告）号： | CN102174553A | 公开（公告）日： | 2011-09-07 |
| 发明（设计）人： | 郑世军;李海花 | 申请（专利权）人： | 中国农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C07K14/31;C07K1/22;C12R1/19 |
| 代理公司： | 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 | 代理人： | 王加岭;张庆敏 |
| 地址： | 100193 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种松鼠葡萄球菌脱皮毒素C蛋白的制备方法，包括如下步骤：(1)以松鼠葡萄球菌基因组DNA为模板，扩增松鼠葡萄球菌脱皮毒素C基因全长，克隆到原核表达载体中，获得重组质粒；(2)将重组质粒进行大肠杆菌转化，用IPTG诱导蛋白表达；(3)提取蛋白粗提液并进行ExhC蛋白纯化。该方法利用基因工程技术成功实现ExhC在大肠杆菌中的高效表达，获得具有生物学活性的高纯度高浓度的ExhC，并且操作简单、成本低廉。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 松鼠 葡萄球菌 脱皮 毒素 蛋白 制备 方法 | ||
【主权项】：
一种松鼠葡萄球菌脱皮毒素C蛋白的制备方法，包括如下步骤：(1)以松鼠葡萄球菌基因组DNA为模板，用SEQ ID No.3和SEQID No.4所示的引物进行PCR反应，扩增松鼠葡萄球菌脱皮毒素C基因全长，经NcoⅠ和NotⅠ酶切后，克隆到原核表达载体中，获得重组质粒；(2)将重组质粒进行大肠杆菌转化，经NcoⅠ和NotⅠ双酶切鉴定阳性克隆，用IPTG诱导蛋白表达，蛋白经SDS‑PAGE检测和Western杂交检测，证明为松鼠葡萄球菌ExhC特异蛋白，并且筛选能够稳定高效表达ExhC的克隆株；(3)提取蛋白粗提液，利用金属离子亲和层析柱纯化ExhC蛋白，经SDS‑PAGE检测证明获得高纯度的ExhC蛋白；(4)采用尿素变性、梯度透析复性方法对纯化的ExhC蛋白进行变性和重折叠获得具有天然结构的ExhC。
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