[发明专利]一种人肺动脉平滑肌细胞分离、培养方法及其应用

摘要

本发明涉及一种从肺动脉血栓内膜剥脱术(PTE)的剥离物中分离、培养人肺动脉平滑肌细胞的方法以及该细胞在肺循环相关疾病研究中的应用。所述方法包括用单一酶消化法对细胞膜进行处理，使细胞损害程度轻，利于细胞存活。该培养方法技术稳定，重复性好，培养的细胞形态均一，生长良好。同时，获得的细胞为进一步深入研究肺循环疾病，尤其是血栓栓塞性肺动脉高压患者的发病机制，疾病发生发展过程以及其PTE预后等实验提供了丰富的特异性强的材料来源。

主权项

一种从人肺动脉血栓内膜剥脱术(PTE)剥脱物中分离培养人肺动脉平滑肌细胞的方法，其特征在于(包括以下步骤)：1)获取原代培养的肺动脉平滑肌细胞：从人肺动脉血栓内膜剥脱术(PTE)中剥脱物中分离人血管平滑肌细胞，并进行原代培养，获得原代培养的人肺动脉平滑肌细胞；2)获取传代培养的肺动脉平滑肌细胞：当步骤1)中的原代细胞长至对数生长期后，用PBS溶液清洗后，加入0.2‑0.5ml 0.1‑0.2％(w/v)胰蛋白酶溶液(含0.01‑0.05％EDTA)33‑37℃消化1～2分钟，当细胞出现回缩、细胞间隙增大时，吸出胰蛋白酶液，加入5～7ml完全培养液，轻柔震荡使之形成细胞悬液，接种至新的培养瓶中，每两天换液一次，即完成传代细胞培养，获得传代培养的慢性血栓栓塞性肺动脉高压病人肺动脉平滑肌细胞。