[发明专利]融合表达含有二硫键蛋白质的方法有效
| 申请号： | 201010601081.2 | 申请日： | 2010-12-21 |
| 公开（公告）号： | CN102533839B | 公开（公告）日： | 2017-06-20 |
| 发明（设计）人： | 张洁;王建权;余彩霞 | 申请（专利权）人： | 上海开阳生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/79 | 分类号： | C12N15/79;C12N15/81;C07K19/00 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 201208 上海市浦东新*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种融合表达含有二硫键蛋白质的方法。具体涉及一种在真核宿主细胞中，融合表达重组蛋白质，特别是活性与二硫键的形成(链内和链间)密切相关的真核重组蛋白质的方法。通过一种融合重组人蛋白质二硫键异构酶(human protein disulphide isomerase，hPDI)或者融合其突变体的方法，在巴斯德毕赤酵母表达系统中，表达外源重组蛋白。该方法适合表达蛋白活性或蛋白折叠(包括单体、二聚体或多聚体形式)有耐于二硫键的正确形成的真核外源蛋白质。通过这种方式表达的蛋白质容易被细胞分泌出胞外，产量高，产物不会大量聚集，产物容易被捕获及纯化，而且得到的目的蛋白N末端均一，活性高。该方法表达的重组蛋白质，有利于进行工业化大规模生产。 | ||
| 搜索关键词： | 融合 表达 含有 二硫键 蛋白质 方法 | ||
【主权项】：
一种在真核宿主细胞中融合表达重组蛋白的方法，其特征在于，融合表达重组人蛋白质二硫键异构酶突变体MP和目的蛋白X；重组人蛋白质二硫键异构酶突变体MP与目的蛋白直接连接或者通过连接肽连接；所述的重组人蛋白质二硫键异构酶突变体MP氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述的目的蛋白X为人内皮抑素Endostatin蛋白；所述的真核宿主细胞为甲醇营养型毕赤酵母菌株X33；表达重组蛋白所用的表达载体为pPICZα。
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