[发明专利]一种孔鳐血管生成抑制因子RCAIF-I的制备方法

摘要

本发明涉及一种孔鳐血管生成抑制因子RCAIF-I的制备方法，步骤为将孔鳐软骨匀浆，离心去渣，取上清液，加入硫酸铵、静置、离心，取沉淀透析，进行离子交换层析，收集各峰后，透析脱盐，经凝胶柱反复分离，得一单峰，即为抑制因子RCAIF-I。本发明的原料为资源较广泛的孔瑶软骨，用来替代鲨鱼在成本上较低廉；提取、纯化工艺较简单，易于操作；制得的抑制因子RCAIF-I经12％的十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳-考马斯亮蓝(Coomassie blue)染色法显示为一条带，分子量为36.2kDa，等电点约为5.0-6.0，具有显著抑制鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)血管生成的作用，可用于肿瘤疾病的治疗。

主权项

一种孔鳐血管生成抑制因子RCAIF‑I的制备方法，其特征在于包括以下步骤：1)提取RCAIF‑I粗提物：将孔鳐软骨破碎匀浆，按1∶4～1∶8g/mL的比例放置于磷酸盐缓冲溶液中于0～4℃下振荡抽提24～48h，以8000～12000rpm的转速离心15～25min，上清液用30％～60％(重量/体积百分比)的饱和硫酸铵进行分级沉淀，将得到的沉淀物置于透析袋中用蒸馏水透析12～24h，透析液冷冻干燥，得到血管生成抑制因子RCAIF‑I粗提物；2)离子交换层析纯化：将上述得到的RCAIF‑I粗提物溶于磷酸盐缓冲溶液中，用微孔滤膜过滤，滤液上Cellulose DE‑52离子交换树脂进行层析，洗脱速度为3～5ml/min，获得5个明显的分离峰，收集第5峰，合并洗脱液透析12～24h，冷冻干燥；3)凝胶色谱纯化：将离子交换纯化粗品溶于磷酸盐缓冲溶液中，浓度为15～20mg/ml，用微孔滤膜过滤后于葡聚糖凝胶G‑75柱中进行洗脱，洗脱速度为0.8～1.5ml/min，获得4个明显分离峰，收集第2峰，透析12～24h，冷冻干燥，得RCAIF‑I。