[发明专利]百万星的组织培养与快速繁殖方法

摘要

本发明提供一种百万星的组织培养与快速繁殖方法，经过外植体的选择、外植体灭菌、不定芽诱导培养、不定芽增殖培养、继代培养、生根培养、过渡移栽等工艺步骤，在所对应的各种培养基上进行培养，直到长成生根苗后直接移栽即可，进种率可达90％，移栽成活率在95％以上。该方法解决了百万星无菌体系建立的关键技术，同时通过激素、营养、培养环境的综合调节，到达了进种效率高，增殖速度快，生产技术稳定的目的，实现了百万星规模化、标准化、工厂化生产。

主权项

一种百万星的组织培养与快速繁殖方法，其特征在于经过以下工艺步骤：A、外植体的选择与灭菌：在已开花的百万星植株中选出花多、重瓣成团、色白，且枝条硬，无病虫害，无畸型的植株，再选取基部健壮且未形成花芽的茎尖或/和腋芽为外植体，剥去外层叶片，切成1.5～2cm的茎段，用常规的加有适量洗涤剂的水清洗后，在质量浓度为0.1％的升汞溶液中消毒15～25分钟，再在质量浓度为0.2％的次氯酸钠溶液中消毒15～20分钟，用无菌水漂洗3～4次；B、不定芽诱导培养：将经过A步骤消毒灭菌后的茎段接种于下列诱导培养基中：MS培养基6‑苄胺基嘌呤6‑BA         1.0～1.5mg/L萘乙酸NAA                0.05～0.1mg/L琼脂                     6.5～7.0g/L白糖                     30g/LpH值                     5.8～6.0在培养温度为22～25℃，光照强度为2000～2500Lx，日光照时间为10～12小时的条件下，诱导培养25～30天，使不定芽长至1～1.5cm，切下；C、不定芽继代增殖培养：将B步骤切下的不定芽置于下列增殖培养基中：MS培养基6‑苄胺基嘌呤6‑BA         0.5～1.0mg/L萘乙酸NAA                0.1～0.3mg/L琼脂               6.0～6.5g/L白糖               30g/LpH值               5.8～6.0在培养温度为20～24℃，光照强度为2500～3000Lx，日光照时间为10～12小时条件下，增殖培养20～25天，使每个不定芽增殖出3～9个芽，芽体高度为2～3cm；D、继代培养：将C步骤所增殖的不定芽在无菌条件下按节切成2～3cm茎段，接种在与C步骤相同的增殖培养基中，并在与C步骤相同的培养条件下进行继代培养，继代周期为18～22d，继代5～7代，得大量的无根不定芽——植株高度为2～3cm的组培苗；E、生根培养：切割D步骤所得组培苗，再将0.5～1cm长的苗尖切下后，余下的基部返回接种到C步骤的增殖培养基中，再次进行继代培养；而切下的苗尖转接至下列生根培养基中：MS培养基萘乙酸NAA          0.3～0.5mg/L吲哚乙酸IAA        0.2～0.3mg/L琼脂               6.0～6.5g/L白糖               30～40g/LpH值               5.8～6.0在培养温度为20～24℃，光照强度为2000～2500Lx，日光照时间为10～12小时条件下，进行生根培养8～12天，得部分苗尖长出根，其余的形成根原基的生根苗和无根苗，出瓶；F、过渡移栽：a、将D步骤出瓶的生根苗和无根苗取出后在质量浓度为0.1％的多菌灵溶液中浸泡1～2分钟，将无根苗基部沾300ppm的根太阳溶液后，与有根苗一同扦插到以珍珠岩为基质的苗床上或育苗盘中，基质厚度为2.5～3.0cm，扦插密度为1.5cm×1.5cm，前期按常规遮阴、保湿，7天后开始长根，35天后移出，完成一级过渡移栽；b、将a步骤移出的苗栽到质量比为红土∶腐叶土＝1∶1的营养基质中，浇透定根水，无须遮阴，每天浇水1～2次，10天后每7～10天喷施一次复合肥，30～35天后移栽于大田，完成二级过渡移栽。