[发明专利]一种胎盘间充质干细胞的规模化制备方法

摘要

本发明涉及一种胎盘间充质干细胞的制备方法。该方法将制备过程程序化，简化操作步骤，缩短操作时间，减少工作量，从而也可在很大程度上避免污染，减少制备过程所需试剂和耗材，并且在做到以上所述之后，增加间充质干细胞的产量。

主权项

一种羊膜源胎盘间充质干细胞的制备方法，其特征在于包括以下步骤：1)用含青霉素、链霉素和肝素钠的PBS缓冲液冲洗胎盘，沿胎盘边缘将胎儿面羊膜慢慢剥离；2)再次冲洗胎盘源羊膜，将羊膜剪成1 5mm3小块；3)将羊膜组织块用含青霉素和链霉素的DMEM培养基混匀，在850g条件下离心10min；4)弃上清，每管加含体积比0.25％胰蛋白酶的DMEM培养基于37℃消化10min，在850g条件下离心10min；5)弃上清，每管加完全培养基后，在2200rpm条件下离心10min；所述完全培养基为含体积比10％的胎牛血清+100kU/L青霉素+100mg/L链霉素的DMEM培养基；6)弃上清，羊膜组织块接种于培养皿中，加完全培养基，在培养箱培养；每3天进行半量换液；7)至10 12天有细胞贴壁生长，细胞克隆形成后，弃掉组织块，加完全培养基进行培养；8)至15 17天细胞克隆融合至80 90％，进行细胞传代。