[发明专利]测定体液中尼古丁的新型间接抑制免疫分析法

摘要

一种测定体液中尼古丁的新型间接抑制免疫分析法，涉及体液中尼古丁的测定方法。依次包括以下步骤：(1)以尼古丁为模板，制备分子印迹聚合物涂层毛细管；(2)将制备好的毛细管与生物传感器联用；(3)采用有机酸盐处理尼古丁样品和标样，调节pH；(4)采用在线分子印记聚合物萃取-等离子体共振技术联用测定体液中的尼古丁。本发明的有益效果是：能够有效地将体液中尼古丁在线完全萃取和预富集，可快速、准确定量分析体液中尼古丁。

主权项

一种测定体液中尼古丁的新型间接抑制免疫分析法，特征在于：依次包括以下步骤：(1)将0.2mmol‑0.5mmol的印记分子尼古丁溶解在烃基取代甲酰胺中，再加入功能单体，震荡，然后再加入交联剂和生孔剂、引发剂，震荡，混合均匀，通氮气后用氮气泵注射进入硅烷化活化的毛细管内，在水浴下聚合，聚合反应完成后，将毛细管连接到氮气泵上，施加压力除去未反应的溶液并使合成的聚合物压缩到毛细管内壁上，施压完成后用有机酸醇溶液冲洗毛细管以除去印记分子尼古丁和致孔剂；(2)将尼古丁分子用乙基‑二甲氨基丙基‑碳二亚胺和N‑羟基丁二酰亚胺衍生并键合到SPR裸金芯片上，将制备好的毛细管与生物传感器联用；(3)采用磷酸盐缓冲液稀释Anti‑NIC单克隆抗体，并加入蛋白质，采用有机酸盐处理尼古丁样品和标样，调节pH；(4)采用在线分子印记聚合物萃取‑等离子体共振技术联用测定体液中的尼古丁：首先将Anti‑NIC单克隆抗体溶液通过毛细管并进入传感器芯片检测，响应信号为RU1，将其作为参照，然后将待测的尼古丁溶液通过毛细管柱，尼古丁分子就被管内的聚合物涂层选择性地萃取和富集，最后再将相同浓度的Anti‑NIC单克隆抗体溶液通过毛细管进入SPR芯片表面，Anti‑NIC单克隆抗体首先被毛细管涂层上萃取的NIC抑制，使剩下的进入芯片表面的Anti‑NIC单克隆抗体量减少，相应的响应信号也减弱，为RU2：ΔRU＝RU1‑RU2。