[发明专利]一种以聚苯乙烯球为模板的石英晶体微天平信号扩增方法

摘要

本发明涉及一种以聚苯乙烯球为模板的石英晶体微天平信号扩增方法，包括如下步骤：(1)纳米金颗粒溶液的制备；(2)纳米金颗粒复合聚苯乙烯球溶液的制备；(3)纳米金颗粒复合聚苯乙烯球修饰的石英晶体微天平提高探针DNA吸附量和靶标DNA检测限。本发明的以聚苯乙烯球为模板的石英晶体微天平信号扩增方法能够增强石英晶体微天平表面不平整度和表面曲率，用于探针DNA的吸附以及对靶标DNA的检测，以聚苯乙烯球为模板利用表面活性剂的不同的静电作用制备的不同表面曲率的纳米金颗粒复合聚苯乙烯球，从而实现表面曲率和活性位点的可控可调。

主权项

一种以聚苯乙烯球为模板的石英晶体微天平信号扩增方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)纳米金颗粒溶液的制备：配制2wt％的HAuCl4水溶液和2wt％的柠檬酸三钠水溶液备用，取0.15mL的HAuCl4水溶液，添加到30mL水中，然后将溶液加热至回流，在搅拌下加入0.08-0.45mL柠檬酸三钠水溶液，继续加热20min；(2)纳米金颗粒复合聚苯乙烯球溶液的制备：(a2)将3毫摩表面活性剂溶解到1L浓度为10毫摩每升、pH为6.8的PBS缓冲溶液中，然后通过针头将溶液从孔径为0.2-0.8μm的尼龙膜中滤除，得到表面活性剂的PBS缓冲溶液；(b2)按照体积比1∶20将浓度为3.8wt％的聚苯乙烯球溶液加入到步骤(a2)中表面活性剂的PBS缓冲溶液中，聚苯乙烯球溶液中聚苯乙烯球的粒径为250-270nm，搅拌；(c2)将步骤(b2)中的溶液离心分层，去除上层溶液，未吸附到聚苯乙烯球表面的表面活性剂则去除，吸附有表面活性剂的聚苯乙烯球则沉淀，重复清洗离心以保证表面活性剂去除完全；(d2)将步骤(c2)中的沉淀重新分散在水中形成吸附好表面活性剂的聚苯乙烯球溶液，并取步骤(1)中制备的纳米金颗粒溶液加入到吸附好表面活性剂的聚苯乙烯球溶液中，搅拌；(e2)将步骤(d2)中的溶液离心分层，去除上层溶液，得到红色沉淀物即为纳米金颗粒复合聚苯乙烯球，重复清洗离心以保证纳米金颗粒去除完全；(f2)将步骤(e2)中获得的纳米金颗粒复合聚苯乙烯球重新溶解到水中，加入浓度为0.375毫摩每升的氢氧化金溶液后搅拌均匀，离心去除上层溶液得到黑色沉淀，最后将黑色沉淀物重新溶解到水中得到纳米金颗粒复合聚苯乙烯球溶液；(3)纳米金颗粒复合聚苯乙烯球修饰的石英晶体微天平提高探针DNA吸附量和靶标DNA检测限：(a3)首先将石英晶体微天平用piranha溶液清洗去除有机物和表面的杂质，所述piranha溶液是用质量浓度为98％的H2SO4与质量浓度为30％的H2O2按照体积比为3∶1混合制成，然后用去离子水清洗石英晶体微天平，N2吹干；(b3)将步骤(a3)中清洗好的石英晶体微天平浸泡于0.5mL 1，6-己硫醇溶液，1，6-己硫醇溶液用体积比为1∶200的HS(CH2)6SH和乙醇配制而成，1，6-己硫醇通过Au-S化学键固定在石英晶体微天平表面，用浓度为10毫摩每升、pH为6.8的PBS缓冲溶液和去离子水清洗去未吸附的1，6-己硫醇，N2吹干；(c3)将步骤(b3)石英晶体微天平浸入纳米金颗粒复合聚苯乙烯球颗粒溶液，纳米金颗粒复合聚苯乙烯球与己硫醇通过Au-S化学键固定到石英晶体微天平表面，用浓度为10毫摩每升、pH为6.8的PBS缓冲溶液和去离子水清洗洗掉多余的纳米金颗粒复合聚苯乙烯球颗粒，N2吹干；(d3)将步骤(c3)中修饰有纳米金颗粒复合聚苯乙烯球颗粒的石英晶体微天平暴露于探针DNA溶液中，探针DNA通过化学键力固定到纳米金颗粒复合聚苯乙烯球表面，用浓度为10毫摩每升、pH为6.8的PBS缓冲溶液和去离子水清洗未修饰到石英晶体微天平表面的探针DNA，N2吹干；(e3)将步骤(d3)中获得的修饰有探针DNA的石英晶体微天平暴露于靶标DNA溶液中，靶标DNA通过与探针DNA的杂交固定于石英晶体微天平敏感膜上，用浓度为10毫摩每升、pH为6.8的PBS缓冲溶液和去离子水清洗未杂交的靶标DNA，N2吹干。