[发明专利]用标记探针进行检测和熔解曲线分析的方法

摘要

本发明涉及一种用标记探针进行检测和熔解曲线分析的方法及包括此探针的试剂盒，属于生物技术领域。本发明的方法在扩增体系中包括热稳定的且不具有5’核酸酶活性的DNA聚合酶、设计标记的寡核苷酸探针及其余扩增体系常用组分，其中标记的探针包括报告标记和猝灭标记；由于上述DNA聚合酶的使用，探针不会被水解，因此可以将探针设计成比较长的长度，从而覆盖包括多个突变核苷酸靶序列的较大区域，有利于克服现有技术中标记探针较短的缺陷。本发明的方法及试剂盒可以简便的实现对靶序列进行检测和熔解曲线分析，可以节省成本，并测定含有多种突变的靶序列。

主权项

一种从样本中检测靶核酸序列的方法，包括：在一个扩增体系中扩增靶序列，所述的扩增体系包括至少一条标记的寡核苷酸探针，一对扩增引物和一个热稳定的且不具有5’核酸酶活性的DNA聚合酶；所述标记的寡核苷酸探针与扩增的靶核酸杂交形成的熔解曲线分析中产生一个熔解谱；所述标记的寡核苷酸探针包括一个报告标记和一个猝灭标记，当标记的寡核苷酸探针处于未与靶序列杂交的单链构象时，猝灭标记能够猝灭报告标记所发出的荧光；当标记的寡核苷酸探针与靶序列杂交时，形成双链结构，报告标记的荧光不能够被猝灭，此时，报告标记的荧光强度要远高于此寡核苷酸探针未与靶序列杂交而处于单链状态时的荧光强度；所述的扩增是不对称扩增，扩增中一条引物的浓度高于另外一条与之配对引物的浓度。