[发明专利]从人骨髓单核级分获得结缔间质干细胞的方法无效
| 申请号： | 200980157235.9 | 申请日： | 2009-11-25 |
| 公开（公告）号： | CN102388129A | 公开（公告）日： | 2012-03-21 |
| 发明（设计）人： | 琼·加西亚洛佩兹;卢西亚诺·罗德里格斯戈麦斯;乔迪·琼·开罗巴迪洛;阿尔诺·普拉卡尔韦;弗朗西斯科·戈迪亚卡萨布兰卡斯 | 申请（专利权）人： | 血液与组织库 |
| 主分类号： | C12N5/0775 | 分类号： | C12N5/0775 |
| 代理公司： | 北京安信方达知识产权代理有限公司 11262 | 代理人： | 陈建芳;阎娬斌 |
| 地址： | 西班牙*** | 国省代码： | 西班牙;ES |
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| 摘要： | 本发明涉及一种使用AB型人血清作为补充物，从人骨髓细胞单核级分获得结缔间质干细胞的方法。所述方法包含获得所述骨髓单核级分的步骤，回收和预扩增结缔干细胞的步骤，以及扩增结缔干细胞直到获得其治疗应用所必需的临床剂量的步骤。 | ||
| 搜索关键词： | 骨髓 单核 获得 结缔 间质 干细胞 方法 | ||
【主权项】：
一种从通过密度梯度离心获得的人骨髓的单核级分获得间质干细胞的方法，其特征在于包含以下阶段：a)遵循以下培养方案，通过原代培养回收和预扩增所述间质干细胞，其中该单核骨髓细胞接种到补充有人AB血清(10％)的DMEM培养基中：i.在第5天用盐水溶液洗涤所述单核培养细胞，并加入补充有人AB血清(10％)的培养基，ii.在第9天用如前所述的相同培养基置换所述培养基，iii.在第12天用胰蛋白酶消化原代培养物，这些细胞产生扩增培养物(c)，b)继代培养：遵循以下培养方案，将在(a)中经洗涤的所述单核细胞再接种到补充有人AB血清(10％)的培养基中：iv.在第5天用盐水溶液洗涤所述培养物，并加入补充有人AB血清(10％)的培养基，v.在第9天用如前所述的相同培养基置换所述培养基，vi.在第12天用胰蛋白酶消化所述原代培养物，回收所述间质干细胞并在氮气容器中冷冻和储存，c)扩增培养：在第12天扩增(a)中获得的所述间质细胞，遵循以下培养方案，将这些细胞在补充有人AB血清(10％)的培养基中再接种和扩增：vii.在第3天和第6天用如前所述的相同培养基置换所述培养基，viii.在第12天用胰蛋白酶消化所述原代培养物，包装这些细胞以便转移到手术室。
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