[发明专利]利用大肠杆菌原核表达系统生产Delta睡眠肽的方法

摘要

本发明涉及一种利用大肠杆菌原核表达系统生产Delta睡眠肽的方法。采用的技术方案是：将得到的delta睡眠肽基因dsip，经酶切后，插入到载体质粒pET28a中，构建质粒pET28a-dsip；将质粒pET28a-dsip转入大肠杆菌BL21感受态细胞中，将得到重组大肠杆菌接种于LB培养基中，当菌液吸光度值为0.6时，30℃条件下用1mM IPTG诱导4～5小时，离心收集菌体细胞；用超声波破碎菌体细胞，去除不溶性细胞碎片，收集上清液；经两次Ni-NTA亲和层析柱，获得delta睡眠肽。本发明通过大肠杆菌表达系统，实现大量表达delta睡眠肽，解决了化学合成中产物不纯和有效成分含量低的问题。

主权项

一种利用大肠杆菌原核表达系统生产Delta睡眠肽的方法，其特征在于步骤如下：1)将得到的delta睡眠肽基因disp，经酶切后，插入到载体质粒pET28a的EcoRI/XhoI位点，构建出表达delta睡眠肽基因的质粒pET28a-dsip；2)将质粒pET28a-dsip转入大肠杆菌BL21感受态细胞中，得到重组大肠杆菌；3)将重组大肠杆菌接种于LB培养基中进行摇瓶培养，当菌液吸光度值达到0.6时，在30℃条件下用1mM IPTG诱导4～5小时，之后离心收集菌体细胞。4)用超声波破碎菌体细胞，功率：200-300W；处理时间：6×9sec，9sec间隔；处理后，6000rpm离心10min，去除不溶性细胞碎片，收集上清液；5)将上清液过Ni-NTA亲和层析柱，经梯度洗脱和浓缩除盐，得到带有组氨酸标签的delta睡眠肽；6)将得到的带有组氨酸标签的delta睡眠肽在体外经肠激酶切割后，再次过Ni-NTA亲和层析柱，经梯度洗脱，得到不带有组氨酸标签的睡眠肽，即为目标产物delta睡眠肽。