[发明专利]利用甘薯淀粉废水生产有机磷农药降解菌剂的方法

摘要

本发明涉及一种利用甘薯淀粉废水生产蜡样芽孢杆菌有机磷农药高效降解菌剂的方法，属于环境生物技术领域。有机磷农药降解株菌采用的是一株分离自油菜叶面的蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)，其菌剂的生产方法包括5个步骤：培养基配制、菌种活化、液体种子制备、液态发酵、菌剂制备，以甘薯淀粉废水提供发酵培养基的主要碳源和水。由本发明技术方案不仅为高浓度甘薯淀粉废水的资源化利用提供了一条新途径，而且生产的有机磷农药降解菌剂能高效原位降解植物叶片上有机磷农药残留，保障食品安全，保护生态环境。

主权项

一种利用甘薯淀粉废水生产蜡样芽孢杆菌有机磷农药降解菌剂的方法，其特征在于：发酵培养基以甘薯淀粉废水为主要原料，生产步骤包括：(1)培养基配制：1)菌种保藏培养基：蛋白胨2g，酵母膏1g，氯化钠5g，琼脂20g，加甘薯淀粉废水至1L，pH 7.0‑7.5；2)菌种活化培养基：蛋白胨2g，酵母膏2g，氯化钠5g，加甘薯淀粉废水至1L，pH 7.0‑7.5；3)种子培养基：MgSO4 1.0g，KH2PO4 5.0g，NaCl 5.0g，K2HPO4 15.0g，蛋白胨10g，加甘薯淀粉废水至10L，pH 7.0‑7.5；4)发酵培养基：MgSO4 20g，KH2PO4 100g，NaCl 100g，K2HPO4 300g，(NH4)2SO40.8kg，加甘薯淀粉废水至200L，pH 7.0‑7.5；以上培养基均在121℃灭菌15‑30min。(2)菌种活化：挑取蜡样芽孢杆菌CGMCC3497菌株至菌种保藏培养基，35℃连续划线、挑单菌落培养两次后，挑取单菌落在菌种活化培养基中，于35℃，150‑200r/min摇床振荡培养12‑24h；(3)液体种子制备：向装有高温灭菌的种子培养基的发酵罐中，按照5％‑10％的接种量接种有机磷农药降解菌，于25‑37℃，通空气培养12‑24h，得到液体种子。(4)液态发酵：向装有高温灭菌的发酵培养基的发酵罐中，按照5％‑10％的接种量接种有机磷农药降解菌液体种子，于25‑37℃，通空气培养18‑60h，得到活菌体培养物。(5)菌剂制备：培养好的发酵液经细菌计数后，超滤浓缩，调节至5×109‑2×1010CFU/mL，加入甘氨酸(质量分数0.3％‑2％)和甘油(质量分数0.5％‑5％)，灌装保藏。使用时用水稀释500‑1000倍。