[发明专利]一种花生四烯酸产生菌高山被孢霉的诱变筛选方法

摘要

本发明公开了花生四烯酸产生菌高山被孢霉的诱变筛选方法。在对高山被孢霉发酵生产AA过程中的微生物糖酵解途径、三羧酸转运体系和脂肪酸合成途径及其它相关途径进行分析后，选用了碘乙酸、乙酰水杨酸作为筛选剂，经过种子的活化、种子的培养、种子液的预处理、种子处理液进行诱变、初筛、复筛、再筛等几个步骤，能得到花生四烯酸生长速率快、发酵周期短、花生四烯酸产量提高幅度很高的菌株，是一种很理想的菌种理性选育技术，具有很高的经济效益和社会效益，工业化前景看好。

主权项

一种花生四烯酸产生菌高山被孢霉的诱变筛选方法，其特征在于该方法包括如下步骤：(1)种子的活化；(2)种子的培养；(3)种子液的预处理：(3a)种子液经无菌生理盐水稀释、震荡、过滤后得到分散均匀的菌悬液；(3b)将菌悬液中加入氯化锂，震荡处理1～6h；(4)对步骤(3b)得到的种子处理液进行诱变；(5)筛选：(5a)初筛：将步骤(4)得到的诱变后的菌悬液涂布于含有EMP途径抑制剂和前列腺素合成酶抑制剂的平板上，挑出最先长出且直径较大的单菌落；(5b)复筛：将挑出的单菌落转接斜面，待斜面长满后，再进行摇瓶培养，向种子液中加入红四氮唑染色剂，通过观察，挑选出变色时间最短、颜色最深的菌落；(5c)再筛：将复筛挑出的种子液进行摇瓶发酵培养，以生物量、油脂产量、花生四烯酸产量为最终筛选指标，挑出花生四烯酸生长能力最强的菌株。