[发明专利]降胆固醇乳酸菌的微胶囊化方法

摘要

降胆固醇乳酸菌的微胶囊化方法，包括降胆固醇乳酸菌的活化、固定化降胆固醇乳酸菌的制备、W/O/W复相乳液法制备微胶囊、冷冻干燥的步骤。本发明采用复相乳液法(W/O/W)制备的降胆固醇乳酸菌微胶囊，因其壁材均属于天然高分子材料，具有稳定、无毒等特性，肠液中2h的释放率为87.4％以上，活菌数可达到7.03×109cfu/mL；置于50℃下3h，活菌数仍能达6.81×106cfu/mL，储存30d活菌数仍可达到6×108cfu/mL；体外降胆固醇试验中，胆固醇降解率为36.07％以上，且具有较好的耐酸性、肠溶性、耐高温性及降胆固醇性，产率在86.62％左右。囊材与载体材料价格低廉，降低了成本。

主权项

降胆固醇乳酸菌的微胶囊化方法，包括以下步骤：1)、降胆固醇乳酸菌的活化挑取斜面固体培养基上的菌落，经梯度稀释后加入到MRS液体培养基中混菌，37℃培养48小时，重复以上操作2～3次；然后取200μL培养液涂布在改良MRS培养基的平板上，37℃恒温培养48～72h；挑取单个菌落，斜面接菌得到活化的纯培养物；所述的挑取斜面固体培养基上的菌落是这样得到的：将经分离纯化的降胆固醇乳酸菌，接种于含0.75wt％CaCO3MRS斜面培养基，4℃保存；2)固定化降胆固醇乳酸菌的制备2.1)活化后的降胆固醇乳酸菌发酵液，经2500～3500rpm/min离心8～12分钟后，去上清液；2.2)将收集到的菌体用pH 7.0的无菌PBS缓冲液洗涤，再次离心；重复三次；2.3)以1∶4～6的体积比菌体和缓冲液的比例，用pH 7.0的无菌PBS缓冲液重新悬浮菌体；2.4)将悬浮菌液与活化后的硅藻土以5mL∶1～2g的比例，缓慢倒入活化后的硅藻土中，同时不断搅拌，然后静置1～3h；2.5)1～3小时后待硅藻土充分吸附菌体后抽滤；3)W/O/W复相乳液法制备微胶囊3.1)将含菌的硅藻土分散到内层水相中，两者的比例为1g硅藻土：30～40mL水相；所述的内层水相中含明胶3.5～4wt％，海藻酸钠2～2.5wt％；将该水相溶液在搅拌的条件下，按照1∶1～1.5体积比加入到含0.2wt～0.3wt％吐温80和0.4wt％～0.5wt％十二烷基磺酸钠的普通植物色拉油中，形成W/O乳液；3.2)将上述W/O乳液按照5∶3～3.5的体积比分散到10～12％(w/v)，pH 4.0的明胶溶液中，形成W/O/W乳液；3.3)同时边搅拌边加入7.5％(w/v)多聚磷酸钠水溶液；多聚磷酸钠水溶液与明胶溶液体积比为3∶1～1.2；3.4)用25％的乙酸溶液调溶液pH到4.0；3.5)放入冰箱冷藏室，将温度降到5～8℃，并保持2小时；4)、冷冻干燥将按步骤3)所得乳状液平铺于器皿中，厚度不超过3mm，预冷到乳状液冻结；打开密封管开关，搬开冷冻舱，将样品置于冷冻舱里的隔板上，关闭密封管开关；打开真空冷冻干燥机开关，等待20～30分钟，直到冷冻舱的温度低于-40℃；打开真空泵开关，等待10～15分钟，直到系统压力低于100millitorr；观察样品是否干燥完全，冻干后取出。