[发明专利]一种基于纳米金棒荧光猝灭效应的微流芯片核酸传感方法

摘要

本发明涉及一种基于纳米金棒荧光猝灭效应的微流芯片核酸传感方法。传统方法对探针要求高，制作成本高。本发明首先将纳米金棒固定在微流通道中，其次将待测核酸分子溶液加入微流通道样品池中使其缓慢通过微流通道，然后将连接有不同寡核苷酸序列的荧光染剂分别加入各微流通道的样品池，DNA杂交缓冲液加入缓冲液池，让连接有寡核苷酸序列的荧光染剂和DNA杂交缓冲液混合流入微流通道，反应0.5～1.5个小时。最后将微流通道芯片置于激光扫描探测样品台，扫描的各微流通道中荧光信号强度，完成对DNA/RNA序列片段的传感侦测。本发明方法降低了成本同时提高了探测的敏感度，适用于微流控芯片这种结构微型化探测微量分子的器件。

主权项

一种基于纳米金棒荧光猝灭效应的微流芯片核酸传感方法，其特征在于该方法包括如下步骤：步骤(1)、在微流通道中固定纳米金棒，具体方法是：将制作好的纳米金棒溶液以摩尔比例1∶90～110同牛血清蛋白混合搅拌反应1～2小时，静置10～12个小时完成反应；将反应后的纳米金棒溶液加入微流通道样品池中，使该溶液充满整个微流通道并静置1～2个小时；随后用清水冲洗微流通道一次；步骤(2)、待测DNA单链或RNA分子同纳米金棒的连接，具体方法是：将未经过任何标记修饰的待测DNA单链或RNA分子溶液加入微流通道样品池中，使其缓慢通过微流通道；合成的纳米金棒表面包覆物具有强正电性，待测DNA单链或RNA分子可以快速地连接并附着在纳米金棒表面，并改变纳米金棒的表面电性趋于中性；随后用清水冲洗微流通道一次；步骤(3)、将连接有不同寡核苷酸序列的荧光染剂分别加入各微流通道的样品池，DNA杂交缓冲液加入缓冲液池，让荧光染剂和DNA杂交缓冲液混合流入微流通道，反应0.5～1.5个小时；当纳米金棒上的待测DNA单链或RNA分子序列与该通道中流过的对应寡核苷酸序列互补时，寡核苷酸将与此序列发生杂交，从而使连接寡核苷酸的荧光染剂在空间距离上靠近纳米金棒，由于纳米金棒高效的荧光猝灭特性，荧光染剂的荧光将被纳米金棒猝灭；而如果纳米金棒上的待测DNA单链或RNA分子序列与该通道中流过的对应寡核苷酸序列没有互补时，杂交过程不发生，荧光染剂仍可发出明显的荧光信号；步骤(4)、将完成反应的微流通道芯片置于激光扫描探测样品台，开启半导体激光光源，控制其扫描过程，每次扫描激光光束通过显微物镜聚焦在微流通道中心位置，通过激光光束扫描逐条微流通道，由CCD接收每次扫描的各微流通道中荧光信号强度，予以记录，从而完成对DNA/RNA序列片段的传感侦测。