[发明专利]AFP基因修饰树突状细胞瘤苗对原发性肝癌发生发展的免疫保护作用无效
| 申请号： | 200910113990.9 | 申请日： | 2009-04-14 |
| 公开（公告）号： | CN101862448A | 公开（公告）日： | 2010-10-20 |
| 发明（设计）人： | 谢裕安;匡志鹏;罗小玲 | 申请（专利权）人： | 广西壮族自治区肿瘤医院 |
| 主分类号： | A61K39/00 | 分类号： | A61K39/00;A61K48/00;A61P35/00;A61P1/16;C12N5/10;C12N15/861;G09B23/28 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 530021 广西壮族自治区*** | 国省代码： | 广西;45 |
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| 摘要： | 本发明涉及构建了AFP分泌型C57BL/6J小鼠肝癌动物模型和制备AFP基因修饰的树突状细胞(DCs)瘤苗及其抗肿瘤作用。包括以下步骤：A、建立AFP分泌型C57BL/6J小鼠原发性肝癌模型；B、从小鼠原发性肝癌细胞中克隆甲胎蛋白(mAFP)基因并测序鉴定；C、构建pAdBM5-mAFP重组腺病毒载体、筛选并克隆获得高滴度重组腺病毒(AdBM5-mAFP)；D、树突状细胞的诱导扩增及表型分析；E、重组腺病毒转导DC(AdBM5-mAFP-DC)，从而获得表达AFP基因的树突状细胞瘤苗。本发明的AFP基因修饰的树突状细胞瘤苗对肝癌的发生有一定的免疫保护作用，也可用于肝癌的治疗。 | ||
| 搜索关键词： | afp 基因 修饰 树突 细胞 原发性 肝癌 发生 发展 免疫 保护 作用 | ||
【主权项】：
AFP基因修饰树突状细胞瘤苗，特征在于采用以下方法制备：A、采用二乙基亚硝胺(DEN)大剂量一次腹腔注射C57BL/6J小鼠100mg/kg(生理盐水配制)。3天后开始灌胃四氯化碳(CCl4)和橄榄油(配制体积比20∶80)，0.05ml/10g，2次/周。第3周DEN再灌胃1次，50mg/kg，同时开始给予含有9％乙醇饮用水，第4周开始CCl4加大剂量到0.08ml/10g，每周一次，连续20周，建立C57BL/6J小鼠肝癌模型。B、通过RT-PCR法扩增的小鼠AFP基因编码区全长通过BglII和PmeI定向构建到pAdBM5穿梭质粒中。C、重组质粒与腺病毒骨架在HEK293细胞中重组，扩增获得高滴度的重组腺病毒(AdBM5-AFP)，通过报告基因绿色荧光蛋白基因(GFP)进行阳性克隆的筛选。D、用小鼠IL-4和GM-CSF从小鼠骨髓中扩增树突状细胞(DC)。E、将重组腺病毒转染DC，获得AFP基因修饰树突状细胞瘤苗。
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