[发明专利]一种测定蜂胶中β-葡萄糖苷酶活性的方法

摘要

本发明提供一种测定蜂胶中β-D-葡萄糖苷酶活性的方法，本发明采用分光光度法测定一定时间内β-D-葡萄糖苷酶将一定量的底物水解成对硝基苯酚的量的多少来确定酶活性的强弱。本发明方法证实蜂胶中确定含有β-D-葡萄糖苷酶，并从成分及药理活性的角度区分蜂胶与其胶源植物的差别，还可在原料蜂胶的层面上区分真假蜂胶，为蜂胶质量标准化提供依据。本发明的方法具有简便，灵敏度高，检测成本低等优点。

主权项

1. 一种测定蜂胶中β-D-葡萄糖苷酶活性的方法，其特征在于通过以下步骤实现：(1)粗酶提取：将蜂胶冷冻，然后捣碎，过30目筛，取3.0g蜂胶粉末加入pH值4.5～6.5的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液，然后加入0.3～0.9g不溶性聚乙烯毗咯烷酮及石英砂，在冰浴上研磨成糊状，低温高速离心，上清液转移到另一只离心管中，二次低温高速离心，取上清液定容至25mL即为粗酶提取液；(2)酶促反应：取两只试管，分别加入0.5mL粗酶液，0.5mL底物浓度5～40mmol/L的对硝基苯酚β-D-葡萄糖苷，其中一只试管在30～60℃下温育1.5小时，温育完毕加入2.5mL1M Na2CO3终止反应，另一只为空白对照，其反应混合液立即在100℃水浴中加热5分钟使酶灭活，然后加入1M Na2CO3终止反应；(3)活性测定：用分光光度计在400nm处测定对硝基苯酚的吸光度，从而确定该酶的活性。