[发明专利]一种采用西瓜子叶节直接再生植株的方法

摘要

本发明公开了一种通过西瓜子叶节离体培养直接再生植株的方法，属于生物技术领域。包括以下步骤：(1)采用西瓜品种傲龙早蜜龙的种子为材料培育无菌苗。(2)在生长点下3-4mm处切去下胚轴，纵向切开胚轴，刮除顶芽、然后切除2/3子叶，获得西瓜子叶节。(3)将子叶节种于不定芽诱导培养基Ms5上，经过14d的培养，出现不定芽；继续培养20-25d，即可获得0.5-1.0cm不定芽。(4)将不定芽移入伸长培养基中继续培养25～30d，不定芽可长到3-4cm。(5)将获得的不定芽移入生根培养基，获得再生植株。通过本发明的实施，可以直接获得完整的西瓜再生植株，为西瓜的基因工程提供的培养技术。

主权项

一种采用西瓜子叶节为外植体直接进行西瓜植株再生的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)无菌苗的培育。挑选成熟饱满的西瓜种子，用1％H2O2浸泡7‑8h后，去除种皮，先75％的酒精消毒60s，用无菌水冲洗2‑3次，再用15％NaClO消毒15min，无菌水冲洗4‑5次，接到萌发培养基上，萌发培养基为0.8％琼脂。接种后，置于28±2℃连续黑暗条件下培养3d，再置于培养温度为26±2℃，16hr、3000Lux光照条件下培养2‑3d。(2)子叶节的获得。播种后5‑6d，当无菌苗子叶由黄转呈浅绿色时，在生长点下3‑4mm处切去下胚轴，纵向切开胚轴，刮除顶芽、然后切除2/3子叶，获得西瓜子叶节。(3)不定芽的诱导。将子叶节接种于不定芽诱导培养基Ms5上，在温度为26±2℃，16hr、3000Lux光照条件下培养14d后可出现不定芽。不定芽出现后，再经过20‑25d的培养，即可获得0.5‑1.0cm不定芽。每2周更换一次培养基。所述的诱导培养基Ms5是按照每升MS基本培养基加入30g蔗糖、8g琼脂、5.0mgAgNO3、1.0mg 6‑BA和0.1mg IBA配制而成，并用0.1M的KOH溶液将pH调整为5.8。(4)不定芽的伸长将0.5‑1cm不定芽移入伸长培养基中继续培养。经过25‑30d培养后，不定芽可长到3‑4cm。每2周更换一次培养基。所述的伸长培养基是按照每升MS基本培养基加入30g蔗糖、8g琼脂、0.2mg KT配制而成，并用0.1M的KOH溶液将pH调整为5.8。(5)生根培养。将3‑4cm的不定芽移入生根培养基中。培养10‑14d即可生根。所述的生根培养基是按照每升MS基本培养基加入30g蔗糖、8g琼脂和0.5mg NAA配制而成，并用0.1M的KOH溶液将pH调整为5.8。(6)再生植株的驯化。当再生植株根长至2cm左右时，揭去封口膜，进行驯化，2的后，用镊子将生根苗取出，移栽于灭菌的营养土中，并用透明的塑料薄膜覆盖保湿，放在培养室中。