[发明专利]一种用于预防烟草花叶病毒病的小干扰RNA的制备和应用

摘要

本发明涉及一种用于预防烟草花叶病毒病的小干扰RNA的制备和应用，其能有效干扰烟草花叶病毒的侵染，预防由烟草花叶病毒引起多种植物病毒病。制备方法为：选择烟草花叶病毒复制酶基因、外壳蛋白基因和运动蛋白基因为靶位，按照以下方法设计小干扰RNA：从开放阅读框3’端300bp以后，避开调控识别区，选择以AA开头、G+C含量为30-50％的19nt的寡核苷酸，以TTCAAGAGA为环碱基，Oligo末端增加RNaseIII结合的终止转录位点4-6个TT区，尾部避免G，再在Oligo 3’端加BamH I识别序列，5’端加Sst I识别序列，在BamH I下游加HindIII识别序列，生物合成同源于TMV基因组的小干扰RNA。

主权项

1、一种用于预防烟草花叶病毒病的小干扰RNA的制备，其特征在于：小干扰RNA的核苷酸序列为：(1)相应于TMV复制酶基因ORF1519-1537、2129-2147片段的19寡核苷酸序列：siRNA1519：F：5’-GATCCAAGCTTCGACTTATCAGAGTGGCAGGCTTCAAGAGAGCCTGCCACTCTGATAAGTTTTTTGAGCT-3’R：5’-CAAAAAACTTATCAGAGTGGCAGGCTCTCTTGAAGCCTGCCACTCTGATAAGTCGAAGCTTG-3’siRNA2129：F：5’-GCTGGATCCAAGCTTCGTTCGTAAGCAGATGAGCTCTTCAAGAGAGAGCTCATCTGCTTACGAATTTTTGAGCTCCTG-3’R：5’-CAGGAGCTCAAAAATTCGTAAGCAGATGAGCTCTCTCTTGAAGAGCTCATCTGCTTACGAACGAAGCTTGGATCCAGC-3’(2)相应于TMV外壳蛋白编码区域的19寡核苷酸序列：F：5’-GATCCAAGCTTCGATGTGAAGATGTCAGCGGGTTCAAGAGACCCGCTGACATCTTCACATTTTTTGAGCT-3’R：5’-CAAAAAATGTGAAGATGTCAGCGGGTCTCTTGAACCCGCTGACATCTTCACATCGAAGCTTG-3’(3)相应于TMV运动蛋白编码区181-199、435-454、781-799的19核苷酸序列：siRNA181：F：5’-GATCCAAGCTTCGCTTATTGATAGTGGATACGTTCAAGAGACGTATCCACTATCAATAAGTTTTTGAGCT-3’R：5’-CAAAAACTTATTGATAGTGGATACGTCTCTTGAACGTATCCACTATCAATAAGCGAAGCTTG-3’siRNA435：F：5’-GATCCAAGCTTCGTGTGAAGATGTCAGCGGGTTTCAAGAGAACCCGCTGACATCTTCACATTTTTGAGCT-3’R：5’-CAAAAATGTGAAGATGTCAGCGGGTTCTCTTGAAACCCGCTGACATCTTCACACGAAGCTTG-3’siRNA781-799F：5’-GATCCAAGCTTCGACTGTCGCCGAATCGGATTTTCAAGAGAAATCCGATTCGGCGACAGTTTTTTGAGCT-3’R：5’-CAAAAAACTGTCGCCGAATCGGATTTCTCTTGAAAATCCGATTCGGCGACAGTCGAAGCTTG-3’。