[发明专利]猴痘病毒的PCR快速检测试剂盒及检测方法

摘要

本发明涉及一种猴痘病毒的PCR快速检测试剂盒及其检测方法，包括试剂A、B、PCR试剂管、TaqDNA聚合酶、含有猴痘病毒特异的F3L基因片断的pUC57质粒的阳性对照和灭菌的双蒸水阴性对照组成的试剂盒。采用简单快速敏感的PCR检测试剂盒，根据猴痘病毒所特有的一段保守序列设计特异引物并进行扩增比较，在3-4小时即可得知猴痘病毒检测结果，灵敏度较高，检测下限低至0.3pg的DNA浓度，确保了检测的准确性与特异性。特别适用于出入境检验检疫中，对来自美国和非洲的实验鼠等饲养啮齿动物以及猴等灵长类动物、家兔及其产品中猴痘病毒进行高灵敏快速检测。

主权项

1.猴痘病毒的PCR快速检测试剂盒，其特征是包括：(1)DNA提取试剂：含试剂A、B，其中：试剂A含有异硫氰酸胍，浓度5M；三羟基甲基氨基甲烷，浓度0.05M；乙二胺四乙酸，浓度0.02M；聚乙二醇辛基苯基醚体积浓度1.3％；试剂B为苯酚、氯仿和异戊醇混合物，三者体积比是25∶24∶1；(2)PCR试剂管成分为：10×buffer：2-4μL，dNTP：0.2-0.8μL，包含dATP、dTTP、dCTP和dGTP，每种浓度为2.5mM；MgCl2：0.2-1μL，浓度2.5mM；引物对1、2，各0.2-2μL，浓度各为10μM；灭菌去离子水：8.7-16.1μL；(3)Taq DNA聚合酶：0.1-0.5μL，浓度5U/μL；(4)阳性对照：即含有猴痘病毒特异的F3L基因片断的pUC57质粒；(5)阴性对照：已灭菌的双蒸水；所说的引物对1和2是DNA片段，碱基序列分别为：5’TTCCGTCAATGTCTACACAGGCA 3’、5’TACAGTTCCGACGATACTCCTCC3’。