[发明专利]一种改良去细胞组织工程瓣膜/血管支架的方法

摘要

本发明公开了一种环氧氯丙烷联合RGD改良的去细胞组织工程瓣膜/血管支架的方法，该方法利用环氧氯丙烷的环氧基团将细胞黏附识别受体的功能域RGD(YGRGDSP)多肽交联固定在去细胞工程瓣膜/血管支架材料上，同时环氧氯丙烷的化学交联功能又可将去细胞支架材料的主体成分——胶原蛋白充分交联，以达到抗钙化和减缓支架材料体内酶解的速度，最终使改良后的去细胞组织工程瓣膜/血管支架较具有更加良好的生物学和力学性能，对种子细胞的高粘附率，在体外和体内的缓酶解性，抗钙化性，真正达到组织工程瓣膜的要求。

主权项

1. 一种改良去细胞组织工程瓣膜/血管支架的方法，其特征在于，包括下列步骤：1)去细胞组织工程瓣膜/血管支架制作：选取新鲜家猪完整主动脉瓣，热缺血时间小于2小时，浸入存4℃PBS液中保存，剔除血管外膜、附着的脂肪及肌肉部分，瓣根血管长4.0cm±0.5cm，血管外径1.2cm±0.01cm，保留完整的主动脉瓣叶，避免损伤；修剪完毕后，经无菌10mM PBS液漂洗2～3次后，装入广口瓶中，瓣膜置于含10g/L胰蛋白酶+0.02％EDTA及双抗溶液的PBS液中，24℃，持续振荡消化24h，期间每12h换上述溶液一次；继而换用含1％TritonX-100及双抗的高渗液，24℃下持续振荡洗涤24h，期间每12h换液一次，必要时重复一次；脱细胞、去垢完成后，无菌含双抗PBS振荡洗涤24h，期间每6h换液一次，以清除残留的细胞碎片和DNA、RNA片段；振荡洗涤完毕后，置于灭菌广口瓶中，封口后送钴源室辐照消毒备用；2)制备线型YGRGDSP肽序列：以多肽合成仪制备线型YGRGDSP序列，并于多肽链-NH2末端氨基酸应用丹磺酰氯标记，并进行荧光显色测定；3)使用磷酸盐缓冲液配制2％环氧氯丙烷，加入YGRGDSP多肽制成多肽液，使多肽液中的YGRGDSP多肽的终浓度为2.0mg/ml；4)将去细胞组织工程瓣膜/血管支架置入多肽液交联反应12小时，使YGRGDSP多肽连接于去细胞组织工程瓣膜/血管支架的胶原和弹性蛋白上。