[发明专利]一种双歧杆菌受体细胞的电转化方法及使用的改进液体培养基

摘要

一种双歧杆菌受体细胞的电转化方法，包括将双歧杆菌细胞处理成双歧杆菌感受态细胞、将双歧杆菌感受态细胞进行电转化前处理以及双歧杆菌感受态细胞电转化步骤。本发明采用独特的感受态细胞处理方法，并增加了感受态细胞电转化前处理，大大提高了双歧杆菌受体细胞成功电转化的几率，而且电转化的效率也有很大提高，可以达到每微克有105以上的转化菌落。

主权项

一种双歧杆菌受体细胞的电转化方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：1)将双歧杆菌细胞处理成双歧杆菌感受态细胞；2)将双歧杆菌感受态细胞进行电转化前处理将感受态细胞放入含有0.8～1.5mM柠檬酸铵以及0.5～0.6M蔗糖的电转化缓冲液中，在4℃条件下培养4～12h；3)双歧杆菌感受态细胞电转化i.分别取多个80μl上述步骤2)培养后的感受态细胞悬液，分别加入0.5μg质粒DNA，体积不超过5μl；ii.混合后，转入预冷0～4℃的0.2cm的电击杯中，并轻敲电击杯，使混合物沉入电击杯底，在电转化仪上进行转化，所述电转化参数条件是电压12kV/cm-1、电容25μF以及电阻200欧；iii.电穿孔后立即向上述管中分别加入0.8mL温度在37℃含有0.4～0.6M蔗糖以及体积百分比为0.04％～0.05％半胱氨酸的液体培养基CM149，使总体积到0.9mL，摇匀后于37℃厌氧培养，使受体菌恢复正常生长状态，并使转化体表达抗生素基因产物，电转化结束。