[发明专利]一种检测人类乳头瘤病毒基因型的方法

摘要

本发明提供了一种检测人类乳头瘤病毒基因型的方法，待检测基因为17型HPV中的一种或几种，包括如下步骤：(1)根据所选择的待检测HPV基因型别通用引物序列的变异位点，设计出针对每型的扩增引物；设计每型特异的延伸引物；(2)PCR扩增；(3)SAP酶处理；(4)延伸反应，延伸产物与所述延伸引物之间，各个型别的延伸产物间的分子量差异不小于9D；(5)采用树脂纯化延伸反应产物；(6)质谱检测，确定待检测HPV基因型别。采用本发明提供的方法，解决了现有某些检测方法不能分型、不能检测多重感染、准确率有限，以及通量低，成本高，且因为探针为RNA，可能会影响反应的稳定性的问题。

主权项

1、一种检测人类乳头瘤病毒基因型的方法，待检测人类乳头瘤病毒基因型为HPV6、HPV11、HPV16、HPV18、HPV31、HPV33、HPV35、HPV39、HPV45、HPV51、HPV 52、HPV 56、HPV58、HPV 59、HPV 66、HPV 68和HPV 73中的一种或几种，包括如下步骤：(1)根据所选择的待检测HPV基因型别通用引物序列的变异位点，修改GP5+/GP6+通用引物，设计出针对每型的扩增引物，在每一特异型别的扩增引物3’位置有12个碱基的完全匹配，且该扩增引物均带了10个碱基acgttggatg的标签序列；设计延伸引物，延伸引物的长度为17-28碱基，在延伸引物的3’端末位包括延伸碱基在内的4个碱基中，包涵一个型特异多态位点标记；延伸引物选择的位置是GP5+/GP6+序列中相对保守的区域；(2)通过PCR扩增，获得含有所述突变位点的靶序列扩增产物；(3)通过SAP酶处理，除去所述扩增产物中含有的dNTPS；(4)通过延伸反应，在延伸引物的3’端连接一个碱基，得到的延伸产物与所述延伸引物之间分子量差异不小于9D，且各个型别的延伸产物间的分子量差异不小于9D；(5)采用树脂纯化延伸反应产物；(6)将纯化后的产物采用基质辅助激光解吸附/电离飞行时间质谱系统进行质谱检测，确定待检测HPV基因型别。