[发明专利]刺山柑提取物及其制备方法与应用

摘要

本发明公开了一种刺山柑提取物及其制备方法。该方法包括将药材粉碎后用水煎煮或用不同浓度的乙醇加热回流提取、提取液浓缩后再加入乙醇沉淀杂质、上清液或浓度高于80％的乙醇提取液减压浓缩，回收乙醇后经干燥后得提取物1。提取物1用水分散溶解后石油醚脱酯，然后用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯萃取部位和水溶性部位分别经减压浓缩和干燥后，分别制成提取物2和3。提取物1含有刺山柑碱A等5个新化合物在内的30个化合物。提取物2含有对羟基苯甲酸等18个化合物。提取物3含有刺山柑碱A等5个新化合物在内的18个化合物。经药效学实验显示提取物1、2和3具有镇痛、抗炎活性，可用于制备治疗风湿性关节炎、类风湿性炎或肩周炎的药物。

主权项

1、一种刺山柑提取物，其特征在于该刺山柑提取物包括提取物1、2和3；所述提取物1含有以下30种化合物：化合物1：刺山柑碱A、化合物2：刺山柑酸A、化合物3：刺山柑碱B、化合物4：刺山柑碱C、化合物5：刺山柑碱D、化合物6：对羟基苯甲酸、化合物7：原儿茶酸、化合物8：香草酸、化合物9：原儿醛、化合物10：丁香酸、化合物11：3，4-二羟基苯甲酸、化合物12：反式丁烯二酸、化合物13：乙二酸、化合物14：5-羟甲基糠醛、化合物15：5-羟甲基糠酸、化合物16：2-糠酸、化合物17：二氢-4羟基-5-羟甲基-2(3H)呋喃酮、化合物18：7-hydroxy-2-oxoindolin-3-ylacetic acid、化合物19：尿嘧啶、化合物20：L-内消旋肌醇、化合物21：尿苷、化合物22：山萘酚芸香苷、化合物23：β-胡萝卜苷-6′-硬脂酸酯、化合物24：corchoionoside C、化合物25：spionoside B、化合物26：白花菜苷、化合物27：β-谷甾醇、化合物28：β-胡萝卜苷、化合物29：芦丁、化合物30：吲哚-3-甲醛；它们的结构式如下：上述30种化合物的特征波谱数据：编         名称            波谱数据号1        刺山柑碱A       ¹H-NMR(DMSO-d₆，500MHz)δ(ppm)：11.34bar(COOH)，                         9.34(1H，s，CHO)，7.13(1H，d，J＝3.8Hz，H-8)，6.29(1H，                         d，J＝3.9Hz，H-9)，5.64(1H，m，H-5)，5.40m(1H，s，                         NH)，3.08(1H，dd，J＝9.2Hz，17.0Hz，H-4a)，2.63(1H，                         dd，J＝6.6Hz，17.0Hz，H-4b)；¹³C-NMR(CD₃OD，125MHz)                        δ(ppm)：179.0(C-11)，175.2(C-12)，175.1(C-3)，125.8(C-8)，                         144.9(C-10)，131.3(C-7)，109.7(C-9)，54.8(C-1)，54.7(C-5)，                         37.3(C-4)；2       刺山柑酸         ¹H-NMR(DMSO，500MHz)δ(ppm)：7.93(1H，s，H-2)，                         2.31(3H，s，CH₃)；¹³C-NMR(CD₃OD，125MHz)δ(ppm)：                         170.6(COOH)，152.2(C-4)，146.1(C-3)，143.2(C-5)，                         140.7(C-2)，14.8(CH₃)；3       刺山柑碱B        ¹H-NMR(DMSO，500MHz)δ(ppm)：9.54(1H，s，CHO)，                         6.98(1H，d，J＝4.01Hz)，6.21(1H，d，J＝3.78Hz)，5.84(1H，                         q，J＝7.24Hz)，5.48(1H，d，J＝14.13Hz)，5.39(1H，d，                         J＝14.93Hz)，1.72(3H，d，J＝7.27Hz CH3)；¹³C-NMR                         (CD3OD，125MHz)δ(ppm)：179.7(C-11)，168.1(C-3)，                         130.8(C-6)，120.3(C-9)，124.0(C-7)，106.5(C-6)，63.3(C-1)，                         53.8(C-4)，19.1(C-10)；4       刺山柑碱C        ¹H-NMR(DMSO，500MHz)δ(ppm)：9.46(1H，s，CHO)，                         6.93(1H，d，J＝3.69Hz，H-3)，6.03(1H，d，J＝3.52Hz，                         H-4)，4.96(1H，d，J＝15.35Hz，H-7a)，4.76(1H，d，J＝15.29                         Hz，H-7b)，4.66(1H，d，J＝14.01Hz，H-6a)，4.34(1H，d，                     J＝13.58Hz，H-6b)，4.34(1H，m，H-5′)，4.25(1H，m，H-4′)，                     3.77(1H，dd，J＝2.49，12.29Hz，H-3′a)，3.69(1H，dd，J                     ＝3.64.49，11.87Hz，H-3′b)，2.27(1H，m，H-6′)；¹³C-NMR                     (CD₃OD，125MHz)δ(ppm)：178.9(C-8)，134.6(C-5)，                     131.2(C-2)，124.2(C-4)，105.0(C-3)，104.1(C-1′)，89.7(C-1′)，                     72.9(C-5′)，62.9(C-3′)，58.0(C-7)，50.3(C-6)，44.9(C-6′)；5      刺山柑碱D     ¹H-NMR(DMSO，500MHz)δ(ppm)：9.45(1H，s，CHO)，                     6.92(1H，d，J＝3.80Hz，H-7′)，6.01(1H，d，J＝3.46Hz，                     H-8′)，4.82(1H，d，J＝15.18Hz，H-1′a)，4.74(1H，d，J                     ＝15.67Hz，H-1′b)，4.70(2H，d，J＝14.37Hz，H-4′a)，4.02                     (1H，d，J＝13.82Hz，H-4′b)，4.17(1H，m，H-4)，3.88(1H，                     s，H-5)，3.89(1H，d，J＝12.07Hz，H-6a)，3.81(1H，d，J＝12.07                     Hz，H-6b)，2.04(1H，dd，J＝5.32，12.82Hz，H-3a)，1.91                     (1H，t，J＝12.43Hz，H-3b)；13C-NMR(CD₃OD，125MHz)                     δ(ppm)：178.8(C-10′)，134.1(C-9′)，131.2(C-6′)，124.0(C-7′)，                     104.8(C-8′)，95.4(C-2)，67.4(C-5)，65.1(C-4)，64.5(C-6)，                     57.8(C-1′)，52.2(C-4′)，35.8(C-3)；6      对羟基苯甲酸  ¹H-NMR(CD₃OD，500MHz)δ(ppm)：7.78(2H，d，J＝8.8                     Hz，H-3，5)，6.72(2H，d，J＝8.8Hz，H-2，6)，为邻位酚                     羟基氢信号；¹³C-NMR(CD₃OD，125MHz)δ(ppm)：170.4                     (C-7)，163.6(C-4)，133.3(C-2，C-6)，123.0(C-1)，116.3(C-3，                     C-5)；7      原儿茶酸      ¹H-NMR(CD₃OD，500MHz)δ(ppm)：7.31(1H，d，J＝1.7                     Hz，H-2)，7.2(1H，dd，J＝8.1，1.7Hz，H-6)，6.9(1H，d，                     J＝8.1Hz，H-5)；¹³C-NMR(CD₃OD，125MHz)δ(ppm)：                     170.7(COOH)，151.8(C-4)，46.3(C-3)，124.2(C-6)，                     123.5(C-1)，118.1(C-2)，116.1(C-5)；8      香草酸        ¹H-NMR(CD₃COCD₃，500MHz)δ(ppm)：12.44(1H，br.s，                     COOH)，9.81(1H，br.s，OH)，7.46(1H，dd，J＝8.2，1.7                     Hz，H-6)，7.43(1H，d，J＝1.7Hz，H-2)，6.77(1H，d，J＝8.2                     Hz，H-5)，3.79(3H，s，OCH₃)；¹³C-NMR(CD₃COCD₃，                     125MHz)δ(ppm)：167.5(C-1)，152.1(C-4)，148.1(C-5)，                     124.9(C-7)，122.9(C-2)，115.5(C-3)，113.5(C-6)，56.4                     (OCH₃)；9      原儿茶醛      ¹H-NMR(CD₃COCD₃，500M Hz)δ(ppm)：9.67(s，1H)，                     8.64(2H，br.s，OH)，7.24(1H，d，J＝1.84Hz，H-2)，7.22                     (1H，dd，J＝8.03，1.86Hz，H-6)，6.87(1H，d，J＝8.01                     Hz，H-5)；10      丁香酸             ¹H-NMR(500MHz，CD₃OD)δ(ppm)：7.20(2H，s，H-2，)，                           3.76(6H，s，OCH₃)；¹³C-NMR(CD₃OD，125MHz)δ(ppm)：                           167.5(COOH)，148.4(C-3，5)，141.6(C-4)，121.5(C-1)，                           108.2(C-2，6)，56.7(OCH₃)；11      3，4-二羟基苯甲酸  ¹H-NMR(MeOD，500MHz)δ(ppm)：7.37(1H，d，J＝2.0        乙酯               HzH-2)，7.31(1H，dd，J＝2.0，8.3Hz，H-6)，6.76(1H，d，                           J＝8.3Hz，H-5)，4.13(2H，q，OCH₂)，1.19(3H，t，-CH₃)；                           ¹³C-NMR(CD₃OD，125MHz)δ(ppm)：166.6(C＝O)，150.7                           (C-4)，145.6(C-3)，123.3(C-1，6)，122.9(C-2，1)，117.2                           (C-5)，115.7(C-2)，60.8(OCH₂)，14.6(CH₃)；12      富马酸             ¹H-NMR(CD₃OD，500MHz)δ(ppm)：6.81(1H，d，J＝15.8                           Hz，H-2)，6.48(1H，d，J＝15.8Hz，H-3)；¹³C-NMR(CD₃OD，                           125MHz)δ(ppm)：134.8(C-2，C-3)，166.1(C-1，C-4)；13      丁二酸             ¹H-NMR(CD₃OD，500MHz)δ(ppm)：2.5(4H，d，J＝15.8Hz，                           H-2，3)；¹³C-NMR(CD₃OD，125MHz)δ(ppm)：176.5(C-1，                           C-4)，30.1(C-2，C-3)；14      5-羟甲基糠醛       ¹H-NMR(MeOD，400MHz)δ(ppm)：11.16(1H，s，COOH)，                           7.78(1H，d，J＝0.82Hz，H-3)，7.22(1H，dd，J＝3.32，0.36                           Hz，H-5)，6.62(1H，dd，J＝3.33，1.73Hz，H-4)；¹³C-NMR                           (MeOD，125MHz)δ(ppm)：159.4(C-1′)，147.6(C-5)，145.9                           (C-2)，118.6(C-3)，112.7(C-4)；15      5-羟甲基糠酸       ¹H-NMR(CD₃OD，500M Hz)δ(ppm)：7.06(1H，d，J＝3.42                           Hz，H-3)，6.36(1H，d，J＝3.43Hz，H-4)，4.47(3H，s，H₂)；                           ¹³C-NMR(CD₃OD，125MHz)δ(ppm)：162.08(C-2′)，160.99                           (C-2)，45.99(C-5)，120.28(C-3)，110.51(C-4)，57.8(C-5′)；16      2-糠酸             ¹H-NMR(MeOD，400MHz)δ：11.16(1H，s，COOH)，7.78(1H，                           d，J＝0.82Hz，H-5)，7.22(1H，dd，J＝3.32，0.36Hz，H-3)，                           6.62(1H，t，J＝3.33，1.73Hz，H-4)；¹³C-NMR(MeOD，                           125MHz)δ：159.41(s，C-1′)，147.61(s，C-5)，145.96(s，C-2)，                           118.62(s，C-4)，112.71(s，C-3)；17      二氢-4羟基-5-羟    ¹H-NMR(MeOD，500MHz)δ：4.42(1H，m，5-H)；4.36(1H，        甲基-2(3H)呋喃酮   t，J＝2.2Hz，J＝3.5Hz，4-H)；3.76(1H，dd，J＝12.4Hz，J＝3.3Hz                           6-H)；3.68(1H，dd，J＝12.5Hz，J＝3.6Hz，6-H)；2.91(1H，                           dd，J＝18Hz，J＝6.8Hz，3-H)；2.37(1H，dd，J＝17.8Hz，                           J＝2.6Hz，3-H)；¹³C-NMR(MeOD，125MHz)δ：178.9(C-2)，                           90.5(C-5)，69.9(C-4)，62.8(C-6)，39.4(C-3)；18   7-hydroxy-2-oxoin  ¹H-NMR(MeOD，500MHz)δ：6.76(1H，t，J＝7.67，H-5)；     dolin-3-ylacetic   6.72(1H，dd，J＝1.1，7.52Hz，H-4)；6.66(1H，dd，J＝7.69，     acid               1.5Hz，H-6)；3.81(1H，dd，J＝3.45Hz，6.41Hz，H-3)；                        2.75(1H，dd，J＝16.44，J＝3.46Hz，H-11)；2.66(1H，dd，                        J＝16.44，J＝6.57Hz，H-11)；¹³C-NMR(MeOD，125MHz)δ：                        175.9(C-11)，172.0(C-2)，145.8(C-7)，126.8(C-8)，124.6(C-5)，                        123.5(C-9)，121.0(C-4)，115.8(C-6)，44.0(C-3)，34.4(C-10)；19   尿嘧啶             ¹H-NMR(DMSO d₆，500MHz)δ：13.11(1H，s)，12.43(1H，                        s)，7.59(1H，d，J＝7.56Hz)，5.88(1H，d，J＝7.57Hz)。                        ¹³C-NMR(DMSO-d₆，125MHz)δ：165.9(C-4)，153.3(C-2)，                        101.4(C-5)，142.2(C-6)。¹H-NMR上的质子信号δ_H13.11(1H，                        s)，12.43(1H，s)为活泼质子的信号，δ_H 7.59(1H，d，                        J＝7.5H7)，5.40(1H，d，J＝7.5Hz)为烯质子信号。¹³C-NMR                        谱显示4个碳信号：165.9，153.3，142.2，101.4分别归属                        为不饱和酰胺、脲基和双键的碳信号；20   内消旋肌醇         ¹³C-NMR(DMSO，400MHz)δ_C：74.3，72.4，72.2，71.1，                        都是连氧碳，δ_C：72.4，71.1两个碳信号峰较高，说明它们                        分别为两个碳信号，化合物应为六元环醇。                        ¹H-NMR(DMSOO，400MHz)：δ4.52(1H，d，J＝3.72Hz)                        δ4.46(1H，d，J＝4.19Hz)，δ4.44(2H，d，J＝3.07Hz)，δ4.32(2H，                        d，J＝5.43Hz)，δ3.70(1H，d，J＝2.68Hz)，δ3.37(1H，dd，                        J＝2.68.9.34Hz)，δ3.11(2H，m)，2.90(1H，td，J＝9.1，4.07                        Hz)从它们的偶合常数看，有一个氢处在e键，其它五个氢                        都处于a键；21    尿苷              ¹H-NMR(DMSO d₆，400MHz)δ：7.98(1H，d，J＝8.1Hz，                        H-6)，5.89(1H，d，J＝4.6Hz，H-1′)，为糖端基氢信号，因                        偶合常数为4.6，表明为α构型，5.69(1H，d，J＝8.1，H＝8.1Hz，                        H-5)，3.7～4.2，均为糖上的氢信号。¹³C-NMR(DMSO-d₆，                        400MHz)δ：166.5(C-4)，152.8(C-2)，143.0(C-6)，91.0(C-5)，                        为尿嘧啶的碳信号，102.9为糖端基碳信号，另外的δ86.6，                        76.0，71.6，62.6均为糖的碳信号，为五碳糖；22    山萘酚3-O-芸香苷  ¹H-NMR(DMSO-d，500MHz)δ：12.56(5OH)，10.80(1H，                        br s，OH)，10.09(1H，br s，OH)，7.98(2H，d，J＝8.6Hz，                        IH-2′，6′)，6.87(2H，d，J＝8.6Hz，H-3′，5′)，6.41(1H，s，                        H-8)，6.20(1H，s，H-6)，5.31(1H，d，J＝7.3Hz，H-1″，                        ofglucose)，4.38(1H，brs，H-rhamnose)，0.99(3H，d，J＝6.1Hz，                        rha-CH₃)；¹³C-NMR(DMSO-d，125MHz)δ：177.3(C-4)，                        164.1(C-7)，161.2(C-5)，159.8(C-4′)，156.8(C-9)，156.4(C-2)，                        133.1(C-3)，130.8(C-2′，6′)，120.9(C-1′)，115.0(C-3′，5′)，                        103.9(C-10)，101.3(C-1″)，100.7(C-1″′)，98.7(C-6)，93.7(C-8)，                            76.3(C-3″)，75.7(C-5″)，74.1(C-2″)，71.8(C-4″′)，70.6(C-3″′)，                            70.3(C-4″)，69.9(C-2″′)，68.2(C-5″′)，66.8(C-6″)，17.7(C-6″′)；23     β-胡萝卜苷-6′-硬   ¹H-NMR(CDCl3，500MHz)δ：0.65(3H，s，C18-H)，0.80-0.98        脂酸酯              (m，CH₃)，1.25(bra，CH₂)，1.47-2.00(CH₂和CH)，2.34(2H，                            t，J＝7.5Hz，CH2COO)，3.36(1H，m，C3-H)，3.51-4.37(m，                            糖上的氢)，5.34(1H，m，C6-H)。¹³C-NMR(CDCl3，125MHz)                            δ：174.2，140.4，122.1，101.3，79.8，76.2，73.8，73.4，                            70.5，63.6，56.8，56.2，50.2，45.9，42.4，39.8，38.9，37.3，                            36.7，36.2，34.3，33.9，31.9，31.9，29.7-29.8，29.5，29.34，                            29.34，29.3，29.2，28.3，26.3，25.0，24.32，23.1，22.7，                            21.1，19.8，19.05，18.80，14.10，11.98，11.87；24     6，9-Dihydroxy-4，   ¹H-NMR(MeOD-d₆，500MHz)δ：5.78(1H，s，H-5)，5.70(2H，       7-megastigmadien-    m，H-6，7)，4.22(1H，dq，J＝6.4，4.4Hz，H-9)，2.41(1H，       3-onel               d，J＝16.8Hz，H-a)，2.06(1H，d，J＝16.9Hz，H-2β)，1.82                            (1H，d，J＝1.2Hz，H-13)，1.14(3H，d，J＝6.5Hz，H-10)，                            0.94(3H，s，H-11)，0.91(3H，s，H-12)。¹³C-NMRδ：201.5(C-3)，                            167.7(C-5)，137.3(C-7)，130.4(C-7)，130.3(C-8)，127.4(C-4)，                            80.3(C-6)，69.0(C-9)，51.1(C-2)，42.7(C-1)，24.8(C-12)，                            24.1(C-11)，23.8(C-4)，19.8(C-13)；25     spionoside B         ¹H-NMR(DMSO-d6，500MHz)δ：6.26(1H，d，J＝15.26Hz，                            H-7)，5.94(1H，dd，J＝15.25，6.11Hz，H-8)，4.75(OH)，                            4.48(1H，dq，J＝6.27，6.36Hz，H-9)，4.14(1H，d，J＝7.64                            Hz，H-1′)，3.75(2H，dd，J＝7.32，2.49Hz，H-11a)，3.49(1H，                            d，J＝7.39Hz，H-11b)，3.63(1H，m，H-6′a)，3.38(1H，m，                            H-6′b)，2.9～3.1(4H，m，H-2′，3′，4′，5′)，2.27(d，J＝17.47                            Hz，H-4a)，2.71(d，J＝17.2Hz，H-4b)，2.67(dd，J＝16.78，                            1.54Hz，H-2a)，2.22(d，J＝17.59Hz，H-2b)，1.22(d，J＝6.49                            Hz，H-10)，1.07(3H，s，H-13)，0.85(3H，s，H-12)。                            ¹³C-NMR(DMSO，125MHz)δ：208.1(C-3)，134.9(C-8)，                            127.6(C-7)，99.8(C-1′)，85.6(C-5)，80.8(C-6)，77.1(C-5′)，                            76.9(C-3′)，76.5(C-11)，73.4(C-2′)，71.7(C-9)，70.2(C-4′)，                            61.1(C-6′)，52.9(C-4)，47.7(C-1)，51.8(C-2)，22.2(C-10)，                            15.2(C-12)，18.9(C-13)；26      白花菜苷            ¹H-NMR(DMSO d6，500MHz)δ：5.47(1H，d，J＝5.86Hz，                            H-8)，5.11(1H，d，J＝4.77Hz，H-8)，5.02(1H，d，J＝5.25                            Hz，H-8)，4.75(1H，d，J＝9.79Hz，H-8)，4.72(1H，t，                            J＝5.56Hz，H-8)，3.68(1H，dd，J＝11.16，5.29Hz，H-8)，                            3.19(1H，m，H-8)，3.17(1H，d，J＝4.98Hz，H-8)，3.063.17(2H，                            m，H-8)，2.23(3H，s，H)。¹³C-NMR(DMSO，125MHz)δ：                            154.2(C-1)，82.0(C-1′)，81.1(C-5′)，78.1(C-2′)，72.8(C-3′)，                             70.0(C-4′)，61.1(C-6′)，18.2(C-2)；27    β-谷甾醇              略28    β-胡萝卜苷            略29    芦丁                   略30    1H-indole-3-carbal-     ¹H-NMR(DMSO-d6，500MHz)δ：7.09～7.15(2H，overlap，      dehyde                 5，6-H)，7.41(1H，d，J＝7.7Hz，7-H)，8.05(1H，d，J＝2.9                             Hz-H)，8.09(1H，d，J＝7.3Hz，4-H)，9.94(1H，s，10-H)，                             11.02(1H，bar，N-H)；¹³C-NMR(DMSO-d6，125MHz)8：                             111.6(C-7)，118.7(C-3)，120.8(C-9)，121.6(C-4)，123.1(C-5)，                             124.1(C-6)，136.6(C-2)，136.9(C-8)，183.9(C-10)。