[发明专利]同型半胱氨酸的测定方法与同型半胱氨酸诊断/测定试剂盒

摘要

本发明涉及利用间接酶循环扩增法、酶比色法及酶联法技术的同型半胱氨酸含量的测定方法，还涉及一种同型半胱氨酸诊断/测定试剂盒。本发明的测定方法灵敏度高、误差小，因此本发明的测定方法与试剂盒可以广泛地应用于临床检验。

主权项

1、一种同型半胱氨酸的测定方法，其特征在于该方法的步骤如下：A、样品准备：1)标准样品的制备将一定量的同型半胱氨酸溶于水或缓冲液中，再将同型半胱氨酸浓度调整到200微摩尔/升，得到的溶液与同体积的1-4mmol/L双硫键截断剂进行混合处理后作为标准样品；2)待测样品预处理血浆样品与同体积的1-4mmol/L双硫键截断剂进行混合处理后作为待测样品；3)空白样品所述的水或缓冲液与同体积的1-4mmol/L双硫键截断剂进行混合处理后作为空白样品，其同型半胱氨酸浓度为0克/升；所述的混合处理是与双硫键截断剂混合后该混合物在室温下静置10分钟或者在温度37℃下保持1-5分钟；B、试剂溶液的制备：分别移取或称取缓冲液、稳定剂、还原型辅酶、同型半胱氨酸脱巯基酶、亚硝酸还原酶(EC 1.7.2.2)、亚硝酸还原酶(EC 1.7.1.4)、高铁细胞色素c与氯化钙，然后将它们混合均匀，用水溶解得到所述的试剂溶液，它们的浓度分别是20-500mmol/L、0.001-7mol/L、0.1-0.35mmol/L、1000-80000U/L、1000-80000U/L、1000-80000U/L、1-50mmol/L与1-50mmol/L；C、待测样品与在步骤B)得到的试剂溶液按照体积比1/10至1/100进行混合，在温度15-45℃下反应5-60分钟，在主波长340nm与副波长405nm下进行测定，测定其吸光度随时间的变化；D、在与步骤C)同样的条件下测定步骤A)标准样品的吸光度随时间的变化；E、在与步骤C)同样的条件下测定在步骤A)使用的水或缓冲液作为空白溶液的吸光度随时间的变化；F、数据处理由步骤C-E)所述测定的主波长340nm的吸光度随时间的变化，根据下式计算得到同型半胱氨酸的含量：△A(标准)-△A(空白)式中：△A(样品)表示步骤C)得到的待测样品的吸光度变化；△A(空白)表示步骤E)得到的空白溶液的吸光度变化；△A(标准)表示步骤D)标准样品的吸光度变化。