[发明专利]蛋白质结晶条件的筛选方法无效
| 申请号： | 200810150369.5 | 申请日： | 2008-07-17 |
| 公开（公告）号： | CN101320006A | 公开（公告）日： | 2008-12-10 |
| 发明（设计）人： | 尹大川;张辰艳;鹿芹芹;郭云珠;郭卫红;王玺凯;李海生;卢慧甍;叶雅静 | 申请（专利权）人： | 西北工业大学 |
| 主分类号： | G01N25/14 | 分类号： | G01N25/14 |
| 代理公司： | 西北工业大学专利中心 | 代理人： | 黄毅新 |
| 地址： | 710072陕*** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种蛋白质结晶条件的筛选方法，首先用不同的缓冲液中溶解蛋白质，使蛋白质的终浓度达到5～50mg/ml，用0.22μm的滤膜过滤出去杂质；用不同的结晶缓冲液来筛选蛋白质的结晶条件；在密闭的可设定变温程序的控温箱中生长蛋白质，控温箱从1～4℃开始线性升温，8～336小时后升温至30～60℃，然后从30～60℃线性降温，8～336小时后降至1～4℃，完成一个循环周期；或者以前述方式线性降温—线性升温—线性降温，完成一个循环周期；一个温度循环周期后取出，在显微镜下统计出蛋白质晶体的条件数目。由于采用了温度扫描方式，蛋白质结晶条件筛选成功率由现有技术的4～10％提高至14～50％。 | ||
| 搜索关键词： | 蛋白质 结晶 条件 筛选 方法 | ||
【主权项】：
1、一种蛋白质结晶条件的筛选方法，其特征在于包括下述步骤：(a)用缓冲液溶解蛋白质，使蛋白质的终浓度达到5～50mg/ml，用0.22μm的滤膜过滤除去杂质；(b)用不同的结晶缓冲液来筛选蛋白质的结晶条件；(c)蛋白质晶体的形核和生长，在密闭的可设定变温程序的控温箱中进行，预先设定该密闭环境的温度，控温箱从1～4℃开始线性升温，8～336小时后升温至30～60℃，然后从30～60℃线性降温，8～336小时后降至1～4℃，完成一个循环周期；或者设定控温箱从30～60℃线性降温，8～336小时后降至1～4℃，再从1～4℃开始线性升温，8～336小时后升温至30～60℃，完成一个循环周期；(d)上述结晶体系在密闭温控箱中完成一个温度循环周期后取出，在显微镜下统计出蛋白质晶体的条件数目。
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